论文部分内容阅读
目的：淋巴瘤起源于淋巴结和淋巴组织，其发生大多与免疫应答过程中淋巴细胞增殖分化产生的某种免疫细胞恶变有关，是免疫系统的恶性肿瘤。淋巴瘤患者通常对传统的化疗方案（如COP，CHOP等）表现出较好的反应，但多数往往在达到缓解后数月至数年内出现复发。寻求治疗新药及新方案成了当前的一个紧迫问题。体外和动物实验显示蛋白酶体抑制剂硼替佐米对包括多发性骨髓瘤、结肠癌、慢性淋巴细胞白血病及胰腺癌在内的许多恶性肿瘤有抗癌活性，并具有明显的抗淋巴瘤作用，其作用机制涉及特异性地抑制泛素一蛋白酶体通路，从而发挥阻止肿瘤细胞生长、播散及血管生成的作用，其毒副作用小，与常规化疗药物无交叉耐药性。国外基础研究显示硼替佐米体外单药及联合其他药物等均可以抑制多种恶性淋巴瘤细胞株的增殖。
SHP-2就是PTPase家族中的一员。是一种含有SH2结构域的酪氨酸蛋白磷酸酶。SHP-2通过SH2功能域结合到酪氨酸磷酸蛋白酶，使其自身结构中的PTP酶激活，从而作为下游信号分子参与信号转导、调节细胞增殖、分化、迁移、死亡，是细胞因子、抗原、细胞外基质等的下游信号分子。
本实验从细胞生长增殖、凋亡及凋亡相关蛋白表达等细胞生物学行为的角度，探讨硼替佐米对淋巴瘤细胞株Raji细胞、Jurkat细胞的影响及SHP-2在此过程所起作用，为临床寻找新的治疗药物提供理论依据。
方法：通过细胞培养的方法对淋巴瘤细胞株Jurkat和Raji进行传代培养，用不同浓度的硼替佐米对其进行处理，于不同时段收取细胞，观察细胞的增殖抑制率及凋亡率，用实时定量PCR的方法检测实验组与对照组SHP-2基因的mRNA的表达水平。
结果：
1.随着硼替佐米浓度、干预时间增加，Jurkat细胞、Raji细胞增殖均有明显的抑制作用，存在明显的剂量依赖性和时间依赖性。
2.随着硼替佐米浓度增加，干预时间增加，Jurkat细胞株、Raji细胞株凋亡率增加，存在明显的剂量依赖性和时间依赖性。
3.硼替佐米干预组SHP2相对表达水平高于未加药物组，未加药物干预的Jurkat细胞中SHP2相对表达量是0.0007±0.00002、未加药物干预的Raji细胞中SHP2相对表达量是0.0109±0.00005，两者SHP2基因表达水平不同，P＜0.05，有统计学意义。
4.当硼替佐米作用于Jurkat细胞株时，随着药物作用时间的延长，SHP-2mRNA的表达水平升高。硼替佐米浓度为1.0时，随着时间延长，SHP2表达水平与未干预组比较无明显变化，P＞0.05，无统计学意义。硼替佐米浓度为5.0、25.0nmol/L时，药物干预12h与24h后，细胞中SHP2表达水平与未干预组比较无明显变化P＞0.05，无统计学意义；随着时间延长，药物干预36h后，SHP2表达水平与未干预组比较有变化，P＜0.05，有统计学意义。硼替佐米浓度为100nmol/L时，药物干预24h与36h后，SHP2表达水平与未干预组比较有差别，P＜0.05，有统计学意义；且36h后SHP2表达水平与24h有明显差别，P＜0.05，有统计学意义。
5.当硼替佐米作用于Raji细胞株时，随着药物作用时间的延长，SHP-2mRNA的表达水平升高。硼替佐米浓度为1.0时，随着时间延长，SHP2表达水平与未干预组比较无明显变化，P＞0.05，无统计学意义。硼替佐米浓度为5.0nmol/L时，药物干预12h与24h后，细胞中SHP2表达水平与未干预组比较无明显变化P＞0.05，无统计学意义；随着时间延长，药物干预36h后，SHP2表达水平与未干预组比较有变化，P＜0.05，有统计学意义。硼替佐米浓度为25.0nmol/L时，药物干预24h与36h后，SHP2表达水平与未干预组比较有差别，P＜0.05，有统计学意义；且36h后SHP2表达水平与24h有明显差别，P＜0.05，有统计学意义。硼替佐米浓度为100.0nmol/L时，随着时间延长，SHP2表达水平与未干预组比较有差别，P＜0.05，有统计学意义；且36h后SHP2表达水平与24h有明显差别，P＜0.05，有统计学意义。
6.当1.0、5.0、25.0、100.0(nmol/L)硼替佐米分别作用于Jurkat细胞株、Raji细胞株时，随着药物作用浓度的升高，SHP-2mRNA的表达水平升高。经两两比较，有统计学意义(p＜0.05)；
7.在Jurkat细胞株和Raji细胞株中，硼替佐米在1.0、5.0、25.0nmol/L，24h时间段内，随着时间延长，SHP2表达水平与未干预组比较无明显变化。
结论：
1、硼替佐米对Raji细胞、Jurkat细胞有增殖抑制和诱导凋亡作用，存在明显的剂量依赖性和时间依赖性。
2、硼替佐米可增加Jurkat细胞株和Raji细胞株中SHP-2mRNA的表达。浓度越高，SHP-2平均表达水平越高。在特定的一个浓度下，呈现时间的依赖性，硼替佐米对SHP-2的表达水平的影响呈剂量依赖性3、在Jurkat细胞株和Raji细胞株中，随着硼替佐米作用浓度的升高及时间的延长，SHP-2mRNA的表达水平升高，说明SHP2基因很可能参与了硼替佐米诱导Raji细胞、Jurkat细胞凋亡的调控。