资木瓜活性成分分析及其抗小鼠CIA的作用机制研究

来源 :三峡大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jzlh6890
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:研究资木瓜中所含的几类活性成分及其含量,建立细胞模型筛选具有抑制肥大细胞脱颗粒作用的活性成分,建立CIA小鼠模型研究筛选出的资木瓜活性成分对该动物模型的作用及机制。  方法:(1)紫外分光光度法检测资木瓜中总皂苷和总黄酮的含量;(2)高效液相色谱法检测资木瓜中齐墩果酸和熊果酸的含量;(3)通过系统溶剂法、D101大孔吸附树脂、正反相硅胶、制备液相等分离法,结合LC-MS,NMR等现代仪器分析方法分离鉴定资木瓜所含单体成分;(4)通过RBL-2H3细胞脱颗粒实验筛选具有抑制肥大细胞脱颗粒活性的成分段;(5)取10周龄DBA/1小鼠28只,随机均分为4组(n=7):正常组、模型组、低剂量组和高剂量组。使用牛二型胶原和弗氏完全佐剂建立小鼠CIA模型,连续给药3周,颈椎脱臼处死小鼠。取小鼠血清、四肢、脾脏,ELISA法检测血清中TNF-α、IL-2、IL-4含量,四肢脱钙包埋切片后进行HE染色。脾脏称重后计算脾指数。(6)免疫组化法检测各组小鼠四肢滑膜组织中肥大细胞类胰蛋白酶和Treg细胞FOXP3的表达变化。(7)TUNEL法检测各组小鼠四肢滑膜组织中滑膜细胞凋亡变化。  结果:(1)资木瓜产区五个县市所产木瓜中总皂苷和总黄酮的含量分别在35.41-58.29 mg/g、4.09-4.69 mg/g之间。齐墩果酸含量在0.60%-0.90%之间,熊果酸含量在0.17%-0.45%之间,齐墩果酸加熊果酸总含量在0.91%-1.07%之间。(2)从资木瓜NBF-50%中分离出单体成分莽草酸丁酯。(3)RBL-2H3细胞脱颗粒实验显示NBF-50%对脱颗粒的抑制作用较好。(4)与空白组相比,模型组小鼠四肢的关节炎评分和足肿胀度均明显升高,低剂量组和高剂量组小鼠的关节炎评分和足肿胀度也有所升高,但相比于模型组,程度减轻,且高剂量组减轻更明显。HE染色结果显示模型组小鼠关节病理破坏严重、滑膜有向关节腔内增生趋势,而低、高剂量组小鼠呈浓度依赖性的改善。(5)类胰蛋白酶检测结果显示,相对于空白组,模型组小鼠滑膜组织中类胰蛋白酶阳性表达的肥大细胞数量显著增多,低、高剂量组小鼠类胰蛋白酶阳性表达的肥大细胞数量相比模型组回落,且呈剂量依赖性。(6)免疫组化检测FOXP3表达发现,模型组小鼠滑膜组织中几乎无FOXP3表达,而低剂量组中出现FOXP3阳性表达,高剂量组中FOXP3阳性表达增加。(7)血清ELISA检测发现,相比于正常组,模型组小鼠血清TNF-α和IL-2水平显著升高,低剂量组有所降低、高剂量组显著降低,而模型组小鼠血清IL-4水平相比正常组降低,给药组呈剂量依赖性升高。(8)TUNEL检测小鼠四肢滑膜组织滑膜细胞凋亡结果显示,与正常组相比,模型组滑膜细胞凋亡无明显变化,而低高剂量组滑膜细胞凋亡增加,且高剂量组滑膜细胞凋亡增加更为明显。  结论:长阳木瓜中总皂苷和总黄酮的含量分别为46.49 mg/g、4.09 mg/g,五个样本中长阳木瓜齐墩果酸含量最高,为0.90%,齐墩果酸加熊果酸总含量也最高,为1.07%。在系统分离资木瓜所得成分段中,NBF-50%对RBL-2H3细胞脱颗粒的抑制作用较好,并从其中分离出含量最大的单体成分-莽草酸丁酯。选择NBF-50%作为动物实验的干预药物,给药后,CIA小鼠的症状减轻,说明NBF-50%对小鼠CIA具有治疗作用。可能通过抑制肥大细胞脱颗粒,减少类胰蛋白酶的释放,升高Treg细胞活性,从而降低Th1细胞活性,升高Th2细胞活性,恢复Th1/Th2平衡,促进滑膜细胞凋亡,发挥抗RA作用。
其他文献
摘 要: 作者将通过实际数学教学案例分析小学数学复习课堂与交互式电子白板的深入融合,希望有利于数学复习课堂教学的进一步开展。  关键词: 交互式电子白板 小学数学教学 复习课堂 融合  引言  交互式电子白板是一种新型高科技电子教学设备,具有数形结合及音像兼备的特点,同时交互式电子白板以它的开放性和灵活性特性,能够让数学老师在进行数学复习时,根据学生需求进行有特色的教学设计,使学生可以对已学到的知
新型冠状病毒肺炎,其病原体为新型冠状病毒;自2019年12月12日首例患者入院以来,截至2020年3月3日24时,我国累计报告新型冠状病毒肺炎确诊病例80 151例,累计死亡2 943例(3.7%);
“学贵有疑”。疑乃思维之开端,学习中有疑就会有思,就会引起认识的需要。因此,在数学教学中,我们要认真学习《数学课程标准》,吃透数学教材,讲究方法,要根据儿童好奇这一心理特征,巧妙设置一些悬念,让学生进行质疑问难,点燃学生兴趣之火,引起学生学习动机,使学生始终积极动脑思考问题,不断分析问题解决问题,既理解了数学知识,又发展了数学思维,从而提高了数学课堂教学的实效性。  一、教给质疑方法  “授人于鱼
目的:分析个体化整体护理在良性阵发性位置性眩晕患者治疗中的临床价值.方法:随机抽取2018年12月至2019年12月期间本院96例良性阵发性位置性眩晕患者,利用摸球法分为研究组(
摘 要: 在初中数学教学中,需要我们认真研究教学策略,更新观念,发挥主观能动性,钻研教材,提高课堂教学质量,采用适当的教学方法,从而达到提高学生数学成绩的目的。  关键词: 初中数学课堂教学 有效教学 教学策略  检验教师教学效果的好坏,通常是看学生的成绩。为了提高学生的数学成绩,在日常的教学工作中我不断总结经验,探究教学方法,探索出了一套提高学生数学成绩的方法,在教学中使用效果显著,现将自己的做
“让学生在生动具体的情境中学习数学”是新课标的一个重要理念。好的教学情境不但能激发学生的学习兴趣和探索欲望,而且能突出教学重点、化解教学难点……当然,在我们的教学中不可避免地出现了很多误区,情境创设中的一些问题和偏差也随之出现。结合身边的教学事例,我认为情境创设应注意以下几点。  一、创设情境应明确“目的性”  一节课的时间是有限的,因此要珍惜宝贵时间,努力提高课堂教学效率,教师创设的情境必须有明
目的:探讨分析老年冠心病心律失常使用优质护理的作用,为临床护理提供可靠的依据.方法:2017年3月至2018年10月我院对74例患者进行分析研究,将患者分成了对照组和观察组,均有3
摘 要: 本文通过问卷调查探索了大学基础英语词汇和商贸专业英语词汇习得的相关性,总结了两者之间的关系,并在此基础上对具体的教学过程提出了相关建议。  关键词: 大学基础英语词汇 商贸专业英语词汇 相关性  一、引言  现如今绝大部分高校都为学生在大三或者大四开设专业英语课程,让学生在大学前两年学完大学基础英语(或综合英语)的学习之后进行专业英语的学习,从而掌握较好的专业英语知识和技能以便毕业后更有
在“中国金都招远国际地质学术论坛”开幕前夕 ,由山东招金集团公司和中科院黄金技术应用研究中心共同合作成立“中国科学院—金都黄金科技中心”签字仪式于 4月 17日在金都
危重型新型冠状病毒肺炎常合并多器官功能衰竭,在控制原发病的同时,要注重并发症的防治,尤其对于既往罹患一种或多种基础疾病的患者,更要高度警惕感染风险及病情演变.