鸡新城疫、禽流感、鸡传染性法氏囊病是当前危害我国养禽业健康发展的三大重要传染性疫病。对IBDV、NDV、AIV进行联合免疫,不仅起到预防这三种疫病感染的作用,还可以提高免疫接种的效率,减少了家禽因多次免疫接种而引起的应激反应。这成为目前规模化养殖场进行免疫的重要手段。本研究将从中国IBD多发地区的鸡场中分离到的1株生物学特性优良的vv IBDV在DF-1细胞上进行适应致弱后的毒株C1,与NDV疫苗株La Sota和AIV（H9）疫苗株XZ13进行联合,选择合适的疫苗佐剂,将其制备为灭活的联合免疫制品,对它们的免疫效果以及机体抗体水平消长的规律进行研究,为研制商品化的鸡新流法三联灭活疫苗奠定基础。本研究主要包括了以下几个方面:1.对分离出的6株IBDV毒株VP2基因进行克隆并测序分析,挑选vv IBDV X1株进行驯化使其适应永生细胞系DF-1,命名为C1株,对X1株及C1株的VP2高变区及七肽区进行比较。同时对C1株的VP2蛋白进行原核表达。测序分析可知IBDV X1株为超强毒株,C1株为减毒株。二者在VP2高变区及七肽区推导氨基酸比对中显示,一些决定病毒毒力的位点发生了变化。同时,本研究成功在大肠杆菌中表达了70 ku的VP2蛋白。2.为选择合适的佐剂,将不同佐剂制备的三联免疫制品以不同抗原量接种SPF鸡,依据其抗体水平和攻毒保护情况,比较佐剂ISA 71和Marcol 52哪一个具备降低抗原用量的潜力。结果显示,ISA 71佐剂相比Marcol 52,具有显著降低IBDV抗原免疫剂量的潜力;在一定的抗原浓度范围内,ISA 71在使用更低剂量的H9抗原免疫时显著优于Marcol 52;而对鸡新城疫病毒,ISA 71 1/8抗原剂量组的抗NDV HI抗体效价显著高于Marcol 52组。同时也表明了C1株免疫原性良好。3.为了解该三联灭活免疫制剂在SPF鸡上免疫后的效果,分别免疫试验鸡,测定免疫28 d后鸡的抗体水平,并进行攻毒试验。结果显示,各组免疫鸡ND HI抗体水平均≥4log2,AIV H9 HI抗体水平均≥9.2log2,IBD中和抗体几何平均滴度均≥1∶5000,最高值达到1∶14117。每组分别攻击NDV强毒F48E9、AIV XZ13和vv IBDV BC6/85后,三组免疫组鸡只100%保护,对照组均未保护。表明该三联灭活免疫制剂安全、可靠、稳定,对SPF鸡只具有良好的免疫效果。4.为探讨该三联免疫制剂三种抗原组分的抗体消长规律,将其接种SPF鸡只,定期检测它们的血清抗体效价。0.3 m L/只接种28 d SPF鸡,诱发抗体产生较快,三种抗原在免疫后第2周均产生了抗体,且在第3~4周左右达到较为理想的高水平抗体。在33周内抗NDV HI抗体值均≥4log2,在32周内抗AIV HI抗体值均≥6log2,抗IBDV中和抗体值在53周时仍相对较高,为5.05、4.53、5.12（log10）。结果表明联合免疫所诱导产生的抗体水平较稳定且持续时间相对较长,免疫保护期至少达32周即7个半月之久。