SpyTag/SpyCatcher环化技术基于一种自发迅速的共价连接反应,是一种通过环化蛋白的骨架以实现目标蛋白的环化,从而提高目标蛋白稳定性的技术。已有研究结果显示SpyTag/SpyCatcher技术介导的环化过程不受环境的影响,不会影响目标蛋白原本的催化活性和功能,且一旦完成便具有极强的稳定性。小泛素样类修饰蛋白（SUMO）是一种十分有效的促溶标签,广泛的应用在重组蛋白的原核表达过程中。泛素样类特异蛋白酶1（ULP1）是SUMO的特异性蛋白酶（ULP）中的一个重要成员,具有将SUMO从目标融合蛋白上切下不残留任何氨基酸碱基的特异性酶切活性,且参与SUMO的成熟过程,但其较差的稳定性限制了它的应用。本文利用SpyTag/SpyCatcher技术环化ULP1,以期获得具有较好的热稳定性的SUMO特异性蛋白酶,为促溶标签SUMO的广泛使用提供支持。本研究使用截断型ULP1（Gly304-Lys621,t ULP1）代替全长的ULP1并对其序列进行了优化,得到了重组截断型ULP1（rtULP1,Gly304-Lys621）。rtULP1既具有ULP1全部的酶活性又能更好的在大肠杆菌中高效表达。本研究设计并表达了rtULP1、Spy Tag-rtULP1-Spy Catcher（crtULP1）、Spy Tag（DA）-rtULP1-Spy Catcher（EQ）（lrtULP1）三种蛋白酶。综合比较了三种蛋白酶的最适反应条件以及热稳定性,更客观的评价了环化结构对rtULP1热稳定性的影响以及SpyTag/SpyCatcher技术对rtULP1热稳定性提高的效果。结果显示,crtULP1的最佳反应酶切温度比lrtULP1高10℃,比rtULP1高5℃。crtULP1在40℃条件下孵育2 h后仍保留87.3%的相对酶活,lrtULP1在40℃条件下孵育2 h后仍保留43.69%的相对酶活,而rtULP1几乎丧失了全部的酶活。且crtULP1在广泛的酸碱范围内都能保持较高的酶活,而rtULP1与lrtULP1只在其最佳反应p H下表现出较高的酶切活性。综合分析实验结果,最终得到SpyTag/SpyCatcher介导的环化技术的确非常有效的提高了rtULP1的稳定性,是一种能显著提高rtULP1热稳定性的有效策略。