炎症因子通过β-catenin激活Wnt途径促进溃疡性结肠炎恶变的机制研究

来源 :2014中华医学会北京分会消化系病学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangold
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  目的:溃疡性结肠炎(UC)的严重合并症之一是癌变,研究发现Wnt途径在UC癌变过程中发挥作用,但其激活的相关机制尚不清楚.本实验拟采用细胞因子TNF-α及 IL-6,作用于结肠癌细胞,观察其对Wnt信号通路中关键蛋白β-catenin的影响,并探索可能的作用通路,验证UC相关性结肠癌发病的可能机制.方法:选用结肠癌细胞株HCT116,给予细胞因子IL-6及TNF-α刺激,Western Blot检测β-catenin蛋白表达,实时荧光定量PCR检测β-catenin mRNA表达,免疫共沉淀的方法检测与细胞核内TCF4蛋白结合的β-catenin蛋白量的变化,双荧光素酶报告基因方法检测β-catenin/ TCF4复合物对Wnt途径的影响,比色法定量检测细胞GSK3β活性;分别加入MAPK激酶特异性抑制剂PD98059及PI3K信号通路特异性抑制剂LY294002后观察上述各项实验指标的变化.结果:IL-6或TNF-α刺激HCT116细胞后,β-catenin在蛋白水平及mRNA水平明显升高(P<0.05);同时与TCF4结合形成复合物表达升高;检测到Wnt途径活性上调(P< 0.05).加入PI3K信号通路抑制剂LY294002后IL-6上述刺激作用降低(P<0.05);加入PI3K信号通路抑制剂LY294002和MAPK信号通路抑制剂PD98059后TNF-α上述刺激作用降低(P< 0.05);IL-6或TNF-α刺激HCT116细胞后GSK3β活性降低,而加入抑制剂LY294002或PD98059后GSK3β活性部分回升.结论:细胞因子IL-6或TNF-α适宜条件作用于HCT116细胞,分别通过PI3K信号通路或PI3K、MAPK信号通路上调β-catenin的表达,部分抑制GsK3β活性,导致β-catenin表达上升,升高的β-catenin蛋白进入细胞核,与TCF4结合形成转录复合物,上调Wnt途径.本研究表明炎性细胞因子可以通过相关的信号通路作用,激活Wnt途径.该过程与散发性结直肠癌变机制不同,为溃疡性结肠炎可能的癌变机制提供了依据.
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