类NADC34 PRRSV TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立

来源 :中国动物传染病学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chengjiangjie
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类NADC34 PRRSV自2018年在我国首次报道以来,流行范围不断扩大,在局部地区已演变为优势毒株。目前尚无针对类NADC34 PRRSV特异性的普通PCR或real-time PCR诊断方法,常规的PRRSV分型与鉴别诊断方法可能导致此类毒株被误诊为类NADC30 PRRSV。因此,本研究根据类NADC30 PRRSV与类NADC34 PRRSV在Nsp2基因的序列差异,设计特异性引物和探针,建立了类NADC34 PRRSV TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果显示,本研究建立的方法特异性良好;不同稀释度的阳性标准质粒在2.8 ×101 copies/μL~2.8× 106 copies/μL之间具有良好的线性范围,标准曲线R2值为0.997;本方法灵敏度高,检测下限为2.8 ×101 copies/μL;重复性分析结果显示,批内和批间试验的变异系数CV值均小于2.5%,呈现出良好的重复性。综上,本研究成功建立了快速检测类NADC34 PRRSV的实时荧光定量PCR方法,为开展此类毒株在我国流行状况的调查提供了有力的检测工具。
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