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通过构建表达载体，建立稳定转染腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的肺癌A549细胞株，观察过表达AMPK后对A549细胞增殖、侵袭能力的影响。
方法扩增AMPK全长序列，双酶切目的基因并插入GV358载体，共转染293T细胞进行慢病毒包装，收集慢病毒上清液后感染A549细胞，建立稳定过表达AMPK的A549细胞株。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测AMPK的表达情况，四甲基偶氮唑蓝(MTT)及Transwell法检测A549细胞增殖、侵袭能力的变化。
结果经限制内切酶鉴定及测序分析，成功构建了GV358-AMPK慢病毒表达载体质粒。与转染空载体相比，转染GV358慢病毒载体的A549细胞AMPK蛋白表达升高5.87倍(P＝0.002)，mRNA水平升高16.12倍(P<0.001)；A549细胞过表达AMPK后，第4～5天细胞增殖活性显著降低(第4天：0.53±0.03∶0.64±0.05，P＝0.021；第5天：0.58±0.04∶0.80±0.07，P＝0.002)，侵袭能力显著减弱[(1.6±0.5)×105∶(3.4±0.3)×105，P＝0.004]。
结论成功构建了AMPK慢病毒表达载体和稳定表达A549细胞株，过表达AMPK可抑制A549细胞增殖及侵袭能力。