【摘 要】
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目的 探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞（LECs）氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法 收集单纯年龄相关性白内障（ARC）患眼的晶状体前囊膜组织（ARC组）和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织（对照组）各3例，进行RNA提取及转录组学测序。应用qRT-PCR检测两组样本中circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1 mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因检测系
【基金项目】
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2020年安徽省重点研究与开发计划项目（编号：202004j07020029）；
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目的 探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞（LECs）氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法 收集单纯年龄相关性白内障（ARC）患眼的晶状体前囊膜组织（ARC组）和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织（对照组）各3例，进行RNA提取及转录组学测序。应用qRT-PCR检测两组样本中circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1 mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性来验证circZNF292、miR-23b-3p、SIRT1之间的靶向关系。体外培养人永生化LECs细胞系HLE-B3,分为空白对照组、NC siRNA组、circZNF292 siRNA组、NC inhibitor组、miR-23b inhibitor组、NC mimics组、miR-23b mimics组、circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组。使用Lipo2000试剂转染，48 h后收获细胞。分别用MTT法、流式细胞术和荧光探针示踪法检测细胞活力、凋亡率及丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、活性氧（ROS）含量。结果 ARC组和对照组晶状体前囊膜组织样本之间鉴定得到469个下调circRNA和1231个上调circRNA,对前10位变化最明显的circRNA进行qRT-PCR验证，最终确定circZNF292在ARC组样本中下调最明显；且circZNF292与miR-23b-3p表达、miR-23b-3p与SIRT1 mRNA表达均呈负相关（r=-0.935,-0.951,均为P＜0.05）。NC siRNA组和空白对照组细胞活力、细胞凋亡率及ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量比较，差异均无统计学意义（均为P＞0.05）。应用H2O2刺激后，与NC siRNA组相比，NC siRNA组+H2O2 HLE-B3细胞凋亡率及ROS、MDA含量均明显升高（均为P＜0.05）,细胞活力及SOD、GSH-Px含量均明显降低（均为P＜0.05）;而circZNF292 siRNA组+H2O2细胞凋亡率及ROS、MDA含量则较NC siRNA组+H2O2均进一步升高（均为P＜0.05）,细胞活力及SOD、GSH-Px含量均进一步降低（均为P＜0.05）。此外，circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组上述指标较circZNF292 siRNA组则被逆转（均为P＜0.05）。结论 circZNF292可通过miR-23b-3p/SIRT1轴调节人LECs氧化应激损伤，从而有望为ARC提供新的治疗靶标。
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