海参筋多糖结构及其免疫增强活性研究

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海参富含多种生物活性物质,其营养保健价值得到广泛的认可。海参加工业发展产生了大量海参内脏废弃物,研究显示海参内脏中所含的营养成分与体壁类似。本文以内脏中的海参筋为研究对象,提取分离出海参筋粗多糖(SCTP),并纯化得到海参筋多糖(SCTPⅡ),在此基础上,对其结构及理化特性进行解析,并进一步探讨了其免疫活性和作用机理。通过单因素实验和响应面实验优化得到海参筋多糖提取工艺的最优条件,结果为80℃,料液比1:12,提取3次,每次提取3 h,该条件下提取得率为6.05%±0.16%。Sevag法除蛋白后得海参筋粗多糖SCTP,经DEAE纤维素-52离子交换柱分离纯化得到海参筋多糖SCTPⅡ。采用高效液相色谱、气相色谱、傅里叶红外光谱、核磁共振波谱、扫描电子显微镜和原子力显微镜、热重分析仪和差示量热扫描仪分析了海参筋多糖SCTPⅡ的纯度,研究了其分子结构和理化性质。结果显示,SCTPⅡ重均分子质量为5.20×10~3kDa,Mw/Mn为1.05。SCTPⅡ的总糖含量为82.05%,糖醛酸含量为2.15%,蛋白质含量为4.91%,表明其为蛋白聚糖。SCTPⅡ由葡萄糖、岩藻糖组成,摩尔百分比为92.09:7.91,单糖残基主要为α-吡喃型,主要由→4)α-D-Glcp-(1→构成。SCTPⅡ的扫描电子显微镜图显示其表面呈边缘光滑的薄片状,由细丝连接形成复杂网状结构,原子力显微镜图显示其形成大小不均一的球形聚集体,这与其具有三螺旋结构有关。TG和DSC分析得出,SCTPⅡ的结构崩解温度为316.04℃,变性峰值温度Tp为73.41℃,焓变ΔH为1.01 kJ/g,表明其具有良好的热稳定性。利用环磷酰胺诱导免疫抑制小鼠模型探究海参筋多糖(SCTP)对免疫活性的影响作用。结果表明SCTP干预可有效缓解(p>0.05)免疫低下小鼠的脏器萎缩,使免疫低下小鼠肝脏及脾脏组织恢复到细胞完整且排列紧密的正常形态,显示其对小鼠肝脏及脾脏具有保护作用;与模型组相比,高剂量SCTP可使小鼠脾淋巴T细胞和B细胞的增殖能力分别显著(p<0.05)和极显著(p<0.01)提高;各剂量SCTP均能提高巨噬细胞的增殖能力,中剂量组SCTP和高剂量组SCTP可极显著(p<0.01)地提高巨噬细胞吞噬能力,说明SCTP可提高免疫低下小鼠腹腔巨噬细胞的免疫活性;环磷酰胺极显著地(p<0.01)降低小鼠血清中的IL-6、TNF-α、IFN-γ含量,中剂量SCTP和高剂量SCTP可极显著(p<0.01)地促进免疫抑制小鼠IL-6、TNF-α、IFN-γ的表达;此外,SCTP可提高肠道中Lactobacillus、Akkermansia等有益菌的丰度,降低Proteus、Alistipes等有害菌的丰度,推测SCTP可通过调整小鼠肠道菌群增强小鼠免疫能力。
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