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自从1982年澳大利亚学者Warren和Marshall发现幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)以来,国内外进行了广泛的Hp的基础与临床研究。现已证实Hp是慢性胃炎、消化性溃疡、胃黏膜相关性淋巴组织淋巴瘤的主要致病因素。目前临床多采用包括质子泵抑制剂(PPI)和抗生素在内的三联或四连疗法治疗Hp感染,具有良好的效果。随后的研究发现质子泵抑制剂除具有公认的胃酸分泌抑制作用和抗溃疡作用外,本身还有类似抗生素的作用,相关抑制机理仍未完全明朗。雷贝拉唑(rabeprazloe,RPZ)是新一代PPI,其体外杀菌效果明显优于其他PPI。本实验室发现,Hp对于RPZ类似抗生素的抑制杀灭
作用可以产生抗性,并且获得了相关的耐药菌株。对抗性菌株进行深入的分子生物学研究有助于寻找到相关的耐药靶点,阐明耐药机理,同时耐药靶点的发现为新型抗幽门螺杆菌药物的改造和研发提供新思路,避免新药设计中的盲目现象。
研究用双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)技术分析了原始菌株与耐药菌株的全菌蛋白图谱,并用Image Master2D Elite软件对比了这些株总蛋白表达谱的差异,发现所有菌株间所表达的蛋白具有很大的相似性,均在90%左右。采用2-DE系统以及相关软件分析并比较了原始菌株与耐药菌株蛋白表达的差异,通过MALDI-TOF质谱和数据库搜索对这些表达差异蛋白进行了鉴定。有2个蛋白在耐药菌株中表达减少,它们包括推测的氧化还原酶和稳定期
存活蛋白(SutE蛋白);1个蛋白在耐药菌株中表达增加,为一假想蛋白;过氧化氢酶亚基的等电点在耐药菌株与原始菌株中存在明显差异。差异蛋白的研究有助于阐明Hp对RPZ的耐药机理。
在蛋白表达水平寻找到部分差异的同时,本研究采用带有氯霉素标签可以随机在染色体上插入的转座子作为研究的主要工具,成功建立了一个全基因组随机插入失活的Hp突变体库,寻找到RPZ抗性相关的基因:"hp0366"和"hp1469"。其中"hp1469"基因编码外膜蛋白(Omp31),该蛋白属于Hop家族,是一种膜孔蛋白,与物质的跨膜转运相关。"hp0366"基因编码多糖合成蛋白,参与蛋白的糖基化过程,糖链会影响糖蛋白的药理活性,生理生化特性(溶解性、稳定性、折叠和分泌)及药代动力学(半衰期、靶向性、免疫原性和抗原性)。该基因失活究竟会引起什么蛋白的糖基化障碍,其在雷贝拉唑抗性机制中的作用需要进一步研究。
本研究在原始菌株与耐药菌株间发现的蛋白表达还是在基因调控方面的差异,有助于进一步研究耐药株对于RPZ的抗性机理和新型抗菌药物的研发。