五黄提取液对人牙周膜成纤维细胞毒性作用的体外研究

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根管治疗是牙髓病和根尖周病最完善和最有效的治疗方法,根管冲洗作为根管治疗的重要环节,可有效地去除和抑制感染根管内细菌及其代谢产物。目前,临床上常用的根管冲洗药物有3%双氧水与0.5%-5.25%次氯酸钠溶液等,上述药物虽有明显的抗菌性,但也有较强的细胞毒性,易对根尖周组织造成刺激损害。3%双氧水有氧化、除臭和杀菌作用,但操作不当,可引起疼痛,甚至发生气肿。次氯酸钠溶液有组织溶解性,应用于根尖孔已破坏或尚未完全形成的牙齿时,易刺激根尖周组织,影响根尖周病变的愈合。中药在我国有着悠久的历史,因资源丰富,成本较低,应用领域日趋广泛。中药冲洗剂含多种成分,其抗菌谱广,杀菌作用强、毒副作用小,日益受到广大学者的重视。五倍子富含鞣酸,具有抗病毒、收敛、抗菌等功效,对内氏放线菌及金黄色葡萄球菌有很好的杀灭作用。黄芩具有多种药理作用,如抗炎、抗氧化、清除自由基等,并对牙龈卟啉单胞菌及其内毒素有很好的抑制作用。目前,五倍子、黄芩已分别被广泛应用于临床各个领域,并取得一定成果,但二者的复合制剂在口腔领域的研究,特别是作为根管冲洗药物方面的研究,国内外尚未见报道。目的:1、研制五倍子、黄芩的提取物复合制剂——五黄提取液作为一种新型的根管冲洗剂。2、通过体外实验,研究五黄提取液对人牙周膜成纤维细胞的毒性作用,与临床常用的根管冲洗剂——0.5%次氯酸钠溶液的毒性作用进行比较,并观察去除五黄提取液后人牙周膜成纤维细胞的回复情况,为五黄提取液的临床应用提供实验依据。方法:1、分别制备五倍子、黄芩提取物,等比例混合后,用含10%FBS、1%双抗的DMEM培养液配置成终末浓度为5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、70μg/ml、100μg/ml的五黄提取液。2、体外培养人牙周膜成纤维细胞至4-6代,接种于96孔板中,空白对照组、实验组、阳性对照组分别加入含10%FBS、1%双抗的DMEM培养液、5种不同浓度的五黄提取液、0.5%的次氯酸钠溶液进行培养,MTT法测定细胞增殖活性及回复能力。结果:1、五黄提取液浓度为5μg/ml~50μ/ml时,对人牙周膜成纤维细胞的增殖有明显促进作用,且五黄提取液浓度为25μg/ml时作用效应最大,与对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。五黄提取液浓度为100μg/ml时,对人牙周膜成纤维细胞增殖有明显的抑制作用,与对照组比较,有显著性差异(P<0.05)。临床常用根管冲洗剂——0.5%次氯酸钠溶液对人牙周膜成纤维细胞有明显的毒性作用,与对照组及五黄提取液组比较,均有显著性差异(P<0.01)。2、人牙周膜成纤维细胞加药培养24h,去除药物,加培养液继续培养72h后,浓度为100μg/ml五黄提取液组与对照组相比,细胞数目无明显差异(P>0.05),0.5%的次氯酸钠溶液组细胞数目明显少于对照组及五黄提取液组,且与二者比较,均有显著性差异(P<0.01)。结论:体外研究表明,5μg/ml~50μg/ml五黄提取液对人牙周膜成纤维细胞无毒性,并且有促进人牙周膜成纤维细胞增殖的作用;100μg/ml的五黄提取液对人牙周膜成纤维细胞的增殖有抑制作用,但其细胞毒性作用可逆;0.5%次氯酸钠溶液对人牙周膜成纤维细胞有明显的毒性作用,且毒性作用不可逆。
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