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目前,苯丙氨酸解氨酶(PAL)在临床和工业上有广泛的应用,但是在应用过程中,酶的稳定性相对较差,为了提高PAL在实际应用中的稳定性,本文通过交联酶聚体(CLEAs)和载体固定化技术的综合应用,制备了以粗孔微球硅胶为内核的PAL-CLEAs和以大孔硅胶为载体的PAL-CLEAs,并分别对两种酶的酶学性质进行了研究。1)以粗孔微球硅胶为内核的PAL-CLEAs的制备条件的确定以及酶学性质研究采用单因素的方法,对粗孔微球硅胶用量、交联剂的浓度和交联时间进行了优化。确定的以粗孔微球硅胶为内核的PAL-CLEAs的最佳制备条件:粗孔微球硅胶的添加量为100mg/mL酶液,戊二醛的浓度为0.2%,交联时间为3h。分别研究了最适反应条件、温度和pH稳定性、变性剂耐受性、操作稳定性、储藏稳定性。结果表明以粗孔微球硅胶为内核的PAL-CLEAs的最适反应温度和pH分别为50℃和9.5;在50和60℃处理情况下,酶活残留率略高于传统的PAL-CLEAs;但是当环境pH值高于6时,处理2h后,以粗孔微球硅胶为内核的PAL-CLEAs的酶活损失严重;对变性剂的耐受性明显高于传统PAL-CLEAs;重复使用实验表明,以粗孔微球硅胶为内核的PAL-CLEAs具有较好的重复使用性;25℃储藏条件下,10d后酶活残留50%左右。2)以大孔硅胶为载体的PAL-CLEAs的制备条件的确定和酶活性质研究首先,采用单因素的方法对大孔硅胶的表面氨基化条件进行了优化,确定了大孔硅胶氨基化温度为110℃,时间为11h,3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)与大孔硅胶的添加比例是2mL/g大孔硅胶。得到的硅胶键接氨基数目为478.3μmol/g。其次,对氨基化大孔硅胶和未氨基化大孔硅胶为载体的PAL-CLEAs(MSG-PAL-CLEAs和SG-PAL-CLEAs)的制备条件进行了优化,确定MSG-PAL-CLEAs的制备条件:0.05g硅胶/mL酶液,吸附时间2.5h,吸附pH8.8,沉淀剂硫酸铵的饱和度为80%,交联剂戊二醛的浓度为1%,交联时间1h。SG-PAL-CLEAs的制备条件和MSG-PAL-CLEAs的制备条件大体相似,不同的是沉淀剂硫酸铵的饱和度为40%,交联剂戊二醛的终浓度为1.5%。研究结果表明,制备得到的MSG-PAL-CLEAs和SG-PAL-CLEAs的酶活回收率均为45%左右。最后研究了MSG-PAL-CLEAs和SG-PAL-CLEAs的最适反应条件和稳定性,测定了MSG-PAL-CLEAs的动力学参数。确定MSG-PAL-CLEAs和SG-PAL-CLEAs的最适反应条件和传统的PAL-CLEAs相同均为50℃和pH8.8。与传统的PAL-CLEAs相比,MSG-PAL-CLEAs的变性剂耐受性、温度稳定性、重复使用性和储藏稳定性均有了显著提高,MSG-PAL-CLEAs转化4个批次后,酶活保留79%,而PAL-CLEAs转化2个批次酶活仅保留49%。25℃,PAL-CLEAs储存29d酶活保留26%,而MSG-PAL-CLEAs的酶活保留仍高达50%。