目的:寨卡病毒(Zika Virus,ZIKV)是由虫媒传播的单链正股RNA病毒,属于黄病毒家族。2015年寨卡病毒于南美洲巴西大规模爆发并迅速传播至邻近50多个国家与地区,感染有几率引起胎儿小头症,成为国际性突发公共卫生事件,受到广泛的关注。干扰素(Interferon,IFN)应答是宿主抵御病毒的初始和基本防御机制,寨卡病毒非结构蛋白NS4B可以通过阻碍IFN-β生成帮助寨卡病毒在宿主细胞内复制。细胞周期退出与神经元分化蛋白(cell cycle exit and neuronal differentiation 1,CEND1)是由两条22-23kd多肽链通过二硫键连接而成的神经元特异性蛋白,参与神经元分化的机制和细胞周期的调节。本文旨在探讨CEND1对寨卡病毒功能的影响,以及CEND1通过与NS4B相互作用发挥其抗病毒功能的具体机制。本文的为进一步研究CEND1蛋白抗病毒功能的分子机理提供了实验依据,为寻找新的抗寨卡病毒药物靶点奠定基础。方法:(1)通过分子克隆构建HA-CEND1及其6个截短质粒并转化入DH5α细菌中培养,使用质粒提取试剂盒提取得到所需质粒。将HA-CEND1质粒梯度转染进U251、A549及Hela细胞中,然后使用寨卡病毒感染,通过q RT-PCR、Western Blot与Confocal实验探究CEND1对寨卡病毒功能的影响。(2)构建稳定表达CEND1的U251细胞系U251-CEND1然后使用寨卡病毒感染,通过q RT-PCR与Western Blot实验进一步验证CEND1对寨卡病毒功能的影响。(3)构建干扰CEND1表达的Neuro-2a细胞系N2A-sh CEND1,使用寨卡病毒感染细胞后,通过q RT-PCR实验探讨干扰CEND1表达对寨卡病毒功能的影响。(4)将前面构建的HA-CEND1及其6个截短质粒分别与Flag-NS4B质粒共转入HEK293T细胞中,利用免疫共沉淀(co-immunoprecipitation,CO-IP)的方法确认CEND1与NS4B结合的具体区域。(5)通过q RT-PCR实验探讨寨卡病毒感染细胞N2A-sh CEND1后,干扰CEND1对细胞内IFN-β生成的影响。结果:(1)q RT-PCR、Western Blot与Confocal实验结果表明在瞬转过表达CEND1的细胞系中,CEND1可以抑制寨卡病毒的m RNA水平和蛋白水平。(2)q RT-PCR和Western Blot结果表明在稳定表达CEND1的细胞系中,CEND1可以抑制寨卡病毒的m RNA水平和蛋白水平。(3)q RT-PCR结果表明在干扰CEND1表达的细胞系中,CEND1可以促进寨卡病毒的m RNA水平。(4)免疫共沉淀实验表明CEND1的130-150aa片段能够与寨卡病毒非结构蛋白NS4B相互作用。(5)q RT-PCR结果表明干扰CEND1可以抑制细胞内IFN-β的上升。结论:细胞周期退出与神经元分化蛋白CEND1可以抑制寨卡病毒在细胞内的m RNA水平和蛋白水平。CEND1可与寨卡病毒非结构蛋白NS4B相互作用且结合区域为130-150aa。干扰CEND1可以抑制细胞内IFN-β的上升。该结果为进一步研究CEND1蛋白抗病毒功能的分子机理提供了实验依据。