腺相关病毒是一种微小病毒,基于它安全性高、免疫原性低、宿主范围广、表达稳定等优点,被当作基因载体,广泛应用于基因治疗领域。目前已有许多AAV药物通过国家相关部门的批准,还有更多AAV基因治疗产品正在进行临床实验,各大高校及生物实验室对于AAV的应用也有着浓厚的兴趣。AAV的研究与生产是以上的基础:在临床治疗中,对用做治疗的重组腺相关病毒载体药物的品质有着极高的要求;在r AAV的生产车间中,各AAV制品公司企业对r AAV的生产工艺不断进行优化;在AAV研究实验室中,研究人员通过大量重复实验去探索AAV各个组件的功能。而AAV的研究与生产过程中,基因检测是必不可缺的一环,至今为止,基因检测的金标准q PCR仍然是AAV基因组检测主流手段。然而AAV研究及生产过程中需要进行基因检测的场景繁多,且检测目的也各有不同,q PCR虽然能达检测目的,但是它无法与所有检测场景契合,这也导致基因检测成为AAV的生产及研究中限速步骤。为此,针对AAV研究及生产过程中的不同场景的基因检测需要,提出一种新型的AAV基因组检测方法,能够有效减轻基因检测对于AAV研究及生产的限制。我们针对AAV研究及生产过程r AAV基因组中杂质DNA的检测提出了基于重组酶聚合酶扩增反应的两种基因检测方法,它们分别通过实时荧光监测和核酸试纸检测的方法检测AAV基因组。这两种方法相比出常规AAV基因组检测方法具有以下优点:反应迅速,在15-30分钟即可得到检测结果;灵敏度高,最低检测限可达10~1copies/μL;特异性强,只对靶基因进行特异性扩增;不依赖精密的控温仪器即可进行反应。在对这两种方法进行优化后它们在AAV基因组检测中表现优异,可满足对r AAV基因组中杂质DNA的检测需求。我们还将微流控技术与试纸型重组酶聚合酶扩增检测结合,构建了一个AAV基因组的即时检测平台。该即时检测平台操作简单,无需经过专业培训即可使用,用户友好性高。同时该即时检测平台还具备便携性,在实际应用中无需将AAV样品转移至特定检测实验室,可以就地进行检测,整个检测流程在20分钟内即可完成,进一步提高了检测的效率,这对AAV的研究与生产有着重要的意义。