基于蔗糖脂肪酸酯促进红曲菌合成黄色素的固定化发酵调控机理研究

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红曲黄色素色泽明艳、安全无毒,是食品领域广受欢迎的天然色素,但其市售产品色价低,无法满足市场需求。目前,不断有研究报道利用促进剂提高红曲黄色素的产量,但大部分促进剂不符合食品安全无毒的要求,无法应用于该领域。在发酵培养基中添加食品安全的外源因子,同时采用新型发酵方式并优化发酵条件,提高红曲黄色素的产量,再结合RNA-seq、q RT-PCR技术解析高产红曲黄色素合成调控机制。论文的主要研究内容如下:在基础培养基中分别添加蔗糖脂肪酸酯、三聚甘油单硬脂酸酯、司班80等食品添加剂进行发酵培养,添加蔗糖脂肪酸酯的红曲霉菌体干重和黄色素产量都是最高的,说明蔗糖脂肪酸酯具有较好的生物相容性,是食品领域提高红曲霉黄色素产量的优良促进剂,其最佳添加量为1 g/50 m L发酵液,摇床的最佳转速是180 rpm。蔗糖脂肪酸酯能够改变红曲霉菌丝体的形态,使菌丝体表面呈现更多褶皱,出现裂纹和空穴,细胞壁受到损坏,增大细胞膜的通透性,使胞内色素萃取到胞外,解除黄色素胞内产物负反馈抑制,从而提高红曲黄色素的总产量,这为今后从形态方面筛选高产黄色素红曲菌提供了参考。发酵方式对红曲色素产量有很大影响,在添加蔗糖脂肪酸酯的条件下,固定化发酵红曲霉能够明显提高红曲黄色素的色价,载体种类和数量在固定化发酵过程中起着至关重要的作用。结果表明:玉米芯内部呈蜂窝状结构,比表面积大,有利于红曲霉的附着生长,且食品安全性高,是本试验条件下的优良载体。在50 m L发酵液中比较理想的载体量为0.75 g(5粒)玉米芯,最佳发酵时间为5 d。固定化发酵过程中,红曲霉菌丝体呈褶皱状,玉米芯载体的生理结构被破坏。另外,固定化红曲霉通过反复分批发酵,日平均产率为12.77AU,可以省去种子反复的培养时间,节约时间和成本,为工业生产提供一种新思路。玉米芯作为农业废弃资源应用在红曲霉固定化发酵中,可以提高其综合利用水平,推动循环经济产业的发展。通过采用RNA-seq技术和生物信息学方法对以上发酵液进行转录组测序,并结合q RT-PCR验证转录组数据的可靠性。质控后的测序数据Q30碱基百分比均在95%以上,基因完整度达到A类高标准,表明转录组测序深度和转录本质量较好,满足建库测序的要求。高通量测序发现差异表达基因390个,其中上调基因244个,下调基因146个。8个显著富集GO功能分别是氧化还原酶活性(GO:0016491)、跨膜转运蛋白活性(GO:0022857)、转运活性(GO:0005215)、有机分子跨膜转运蛋白活性(GO:0015318)、离子跨膜转运体活性(GO:0015075)、跨膜运输(GO:0055085)、丙酮酸代谢过程(GO:0006090)和膜固有成分(GO:0031224),KEGG显著富集的代谢途径分别是糖酵解/糖异生途径和酪氨酸代谢途径。结果表明:红曲霉固定化发酵有效调控了丙酮酸代谢过程,同时使膜固有成分发生变化,改变膜的通透性,提高了黄色素跨膜运输能力。另一方面,固定化发酵通过上调色素合成相关基因的表达和改变代谢流,增强糖酵解/糖异生途径;酪氨酸通过系列反应生成黄色素合成的前体物质,如乙酰Co A,进入到三羧酸循环,参与到聚酮途径中,从而提高黄色素产量。q RT-PCR验证数据与测序数据变化趋势一致,验证了GO功能和KEGG代谢途径的分析。
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