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目的1、观察神经毒素1-甲基-4-苯基-1 , 2 , 3 , 6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl- 1,2,3,6 -tetrahydropyridine, MPTP)小剂量长期注射诱导的帕金森病(Parkinson’s disease, PD)小鼠模型,脑黑质多巴胺能神经元数目减少和细胞凋亡情况。2、观察神经毒素1-甲基-4-苯基-1 , 2 , 3 , 6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl- 1,2,3,6-tetrahydropyridine, MPTP)小剂量长期注射诱导的慢性帕金森病(Parkinson’s disease, PD)小鼠模型,脑黑质部α-突触核蛋白的表达改变和异常聚集的情况。方法本研究采用MPTP小剂量长期注射诱导慢性帕金森病小鼠(C57BL)模型,设置实验组和正常对照组,每组各40只小鼠,实验组给予MPTP背部皮下注射,对照组给予生理盐水背部皮下注射。注射完毕后于不同时间点,观察各组小鼠是否出现类帕金森病症状,在形态学上采用HE染色观察黑质细胞丢失情况,采用SP免疫组织化学法检测酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase, TH)和α-突触核蛋白的表达;采用原位末端标记法(TUNEL法)检测黑质多巴胺细胞凋亡现象。结果1、行为学观察结果:与对照组比较,实验组小鼠爬杆时间延长有明显差异(p<0.05),且出现震颤、竖毛、前腿抬高、竖尾、动作缓慢和减少等异常行为,对照组未出现帕金森病样异常行为。2、形态学检查结果:HE染色法染色后,实验组与对照组比较黑质区多巴胺能神经元细胞数量减少,丢失明显。3、SP免疫组织化学法结果:在处理完毕后第1天,第3周,第2月,第6月,实验组小鼠中脑黑质部TH免疫组织化学染色阳性细胞数明显减少,阳性细胞数(CPC)较对照组均有显著差异(p<0.05)。注射完毕后各时间段,实验组小鼠TH表达有所变化,注射完毕后第1天TH阳性染色细胞减少最多,至第3周后逐渐开始回升,直至第6月时仍较对照组阳性染色少。4、TUNEL法结果:在处理完毕后第1天、第3周、第2月、第6月,发现实验组均有较多染色为棕黄色的凋亡细胞,主要集中在中脑黑质区。而对照组偶见凋亡细胞。5、α-突触核蛋白免疫组织化学法结果:在注射完毕后第1天、第3周、第2月、第6月,实验组较对照组黑质部α-突触核蛋白阳性染色增多,阳性细胞数增多,具有显著差异(p<0.05)。实验组处理完毕后各阶段α-突触核蛋白阳性表达增加,并在黑质细胞内异常聚集。α-突触核蛋白,在处理完毕后第1天就开始出现,至第3周表达最多,随后稍有减少,但仍高于第1天,并可持续表达至第6月。结论1、MPTP诱导C57BL小鼠出现类帕金森病症状;病理改变上出现中脑黑质部多巴胺能神经元数目减少及细胞凋亡现象,其发病呈慢性进行性的过程。实验结果显示:MPTP慢性帕金森病模型中,细胞凋亡参于了PD的发病机制。MPTP慢性帕金森病模型是更能代表临床帕金森病自然病程的动物模型。2、慢性长期注射MPTP诱导的帕金森病小鼠模型,脑黑质部α-突触核蛋白持续性表达增多,并出现异常聚集;α-突触核蛋白表达的时间可持续6个月以上。