干扰素（Interferon,IFN）是一类由动物机体产生的多功能分泌性蛋白,具有抗病毒、抗肿瘤、免疫调节等生物学功能。α干扰素（Interferon alpha,IFN-α）主要由单核—吞噬细胞产生,是天然免疫和获得性免疫的桥梁,可以激活NK细胞的细胞毒性并促进其增殖,调节机体免疫。它具有抗病毒作用,既可以与疫苗配合使用,增强免疫效果,也可以单独使用,提高动物的免疫机能,治疗病毒性疾病。猪α-干扰素（porcine interferonα,Po IFN-α）是一种能有效预防和治疗猪病毒性疾病的广谱抗病毒药物,具有毒副作用小和速效多能的特点,对于常见的病毒性传染病比如猪伪狂犬病、口蹄疫和蓝耳病等都具有良好的预防和治疗作用。本研究是在前期成功构建重组猪α干扰素酵母菌和通过对发酵工艺条件进行筛选和优化得到最佳的发酵条件的基础上,将重组猪α干扰素放大至50 L发酵罐进行培养,然后收集发酵上清得到重组猪α干扰素,最后,将重组猪α干扰素应用于抗伪狂犬病毒临床试验。本研究使用前期成功构建的重组酵母菌接种于50 L的发酵罐进行大规模培养,选用的培养基成分为BSM基础培养基和PTM1微量元素,选用经优化筛选得到的最佳发酵条件:种子液的最佳培养时间为24 h,接种量为5%,诱导前发酵液的p H为5,温度为30℃,诱导开始调整p H至6.0,温度调节到28℃,发酵液的体积为一般不超过发酵罐体积的2/3为宜。发酵收集得到的猪α干扰素,我们采用5%的甘露醇作为冻干保护剂进行冻干,可以解决该制品热稳定性差、不易长期保存和远距离运输等问题。试验采用细胞病变抑制法来测定重组猪α干扰素的抗病毒效价,即在Vero单层细胞上用102倍TCID50PRV感染,然后观察结果,结果表明,重组猪α干扰素抗PRV的活性为4.9×107U/L。在实验室条件下,应用重组猪α干扰素对猪伪狂犬病进行预防试验。在本试验中,用重组猪α干扰素分别对25头7日龄哺乳仔猪和25头2月龄断奶仔猪进行了猪伪狂犬病预防试验。将25头7日龄哺乳仔猪随机分为A、B、C、D、E五个试验组,每组5头,A组为空白对照组,第5天肌肉注射生理盐水;B、C、D组为干扰素预防组,第2天注射干扰素;E组为病毒对照组,试验前3天不做任何处理,第5天对该组试验猪和B、C、D组试验猪进行PRV攻毒。攻毒后观察7日,发现空白对照组和干扰素预防组试验猪精神状态、食欲、粪便均正常;攻毒对照组试验猪在攻毒36 h左右均出现典型临床症状,发病率100%,出现体温升高,呼吸困难、眼部有脓性分泌物、闭眼、精神沉郁等症状。同样将25头2月龄断奶仔猪随机分为a、b、c、d、e四个试验组,每组5头,a组为空白对照组,第5天肌肉注射生理盐水;b、c、d组为干扰素预防组,第2天注射干扰素;e组为病毒对照组,试验前3天不做任何处理,第5天与b、c、d组同时进行PRV攻毒。攻毒后观察7日,发现所有攻毒对照组仔猪在攻毒48 h左右均出现发病症状,发病率100%,出现体温升高、呼吸困难、咳嗽、精神沉郁、眼睑水肿等症状。空白对照组和干扰素预防组试验猪精神状态、食欲、排粪均正常。综上所述,本试验在50 L发酵罐中发酵得到了高表达的重组猪α干扰素,在实验室条件下,进行了猪伪狂犬病预防试验,试验结果证明,重组猪α干扰素对猪伪狂犬病具有较为显著的预防作用,为重组猪α干扰素应用到工业化大规模生产和防治猪病毒性疾病奠定了一定的基础。