【摘 要】
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该研究的目的就是应用基因工程和蛋白质工程技术研制出具有自主知识产权的重组猪α、β和γ干扰素并研究其抗病毒作用,为中国重组猪干扰素的工程化生产及其在养猪业中的应用
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该研究的目的就是应用基因工程和蛋白质工程技术研制出具有自主知识产权的重组猪α、β和γ干扰素并研究其抗病毒作用,为中国重组猪干扰素的工程化生产及其在养猪业中的应用奠定基础.研究主要从以下几个方面展开:1.应用RT-PCR从新城疫病毒诱导培养的猪外周血白细胞总RNA中克隆到一个新的猪α干扰素基因,与GenBank上登录的猪α1干扰素基因(M28623)同源性为97.7％.亚克隆猪α-干扰素成熟蛋白编码基因并对其5端的1个稀有密码子进行大肠杆菌偏嗜性改造.2.采用大肠杆菌偏嗜性密码子人工合成了Lefevre等报道的猪α1干扰素成熟蛋白编码基因,并成功地在大肠杆菌中表达,表达量约为菌体总蛋白的25.4％.3.应用PCR从猪肝细胞基因组中扩增出猪β干扰素基因,测序结果表明克隆的猪β干扰素基因与GenBank上登录的猪β干扰素基因(S41178)的序列同源性为100％.4.亚克隆猪β-干扰素成熟蛋白编码基因并对其第3、7和164位的3个氨基酸密码子进行毕赤酵母偏嗜性改造后克隆到酵母表达载体pPICZαA,构建成转移重组载体pPICZαA-PIB.5.应用RT-PCR从ConA诱导培养的猪外周血白细胞总RNA中克隆到猪γ干扰素基因,与GenBank上登录的猪γ干扰素基因(S63967)的序列同源性为100％.6.构建了猪γ干扰素基因的真核表达载体pIRES-G.7.以人工乳饲喂的低日龄仔猪为研究对象,初步试验了重组猪α干扰素防治猪传染性胃肠炎的效果.
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