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目的:研究补肾活血药与CircRNA-25487之间的关系以及协同调控h BMSCs的作用机制,观察能否通过调控CircRNA-25487的表达水平来促进h BMSCs的成骨分化,同时配合补肾活血药来为临床上预防、治疗TIONFH提供新的有效方法。方法:1.将签署知情同意书的TIONFH患者和股骨颈骨折未出现坏死的各6名患者分为ONFH组和Normal组,分别进行人工全髋关节置换手术,术中分别抽取自体骨髓液10m L,采取密度梯度离心法进行h BMSCs的提取、分离、纯化,并按1:3的比例进行传代培养,用光学显微镜在培养后第3、12天观察细胞生长状况和形态变化过程。2.选用第3代的h BMSCs,接种于12孔板或者96孔板培养提取细胞。分成ONFH组和Normal组两组进行试验,ONFH组为TIONFH患者的h BMSCs,Normal为股骨颈骨折未出现坏死患者的h BMSCs,用PRMI1640完全培养基培养,通过茜素红染色观察细胞成骨分化能力;ALP（碱性磷酸酶）染色观察细胞成骨活性;QPCR在成骨诱导3、6、8天检测两组细胞成骨基因BMP2、Runx2、Osterix、ALP、OPN的c RNA表达水平;成骨诱导干预8天后Western blotting检测两组相关成骨基因:BMP2、Runx2、Osterix、ALP、OPN、GAPDH（作为参考蛋白）。倒置显微镜观察两组细胞染色情况,分析CircRNA-25487表达水平与h BMSCs成骨分化之间的关系及作用机制。3.选取生长情况良好的TIONFH患者的第3代h BMSCs细胞进行试验,将细胞接种于12孔和96孔细胞培养板进行培养,用PRMI1640完全培养基培养,分成诱导剂（Inducer）组和诱导剂+补肾活血中药（Inducer+FHNHC）组进行干预。Inducer组:加入成骨细胞诱导剂（每孔2m L）、β-甘油磷酸钠、地塞米松和抗坏血酸;Inducer+FHNHC组:在诱导剂组的基础上加FHNHC（400ug/m L）。成骨诱导8天后茜素红染色观察细胞成骨分化情况;成骨诱导后第3、6、8天通过ALP染色观察细胞成骨活性;成骨诱导干预8天后Western blotting检测两组相关成骨基因BMP2、Runx2、Osterix、ALP、OPN、GAPDH（作为参考蛋白）的表达水平;经成骨诱导后在第3、6、8天用QPCR检测两组CircRNA-25487的表达水平。倒置显微镜观察两组细胞染色情况,分析补肾活血中药与CircRNA-25487的表达之间的作用机制,以及对h BMSCs的成骨细胞的增殖、分化能力的调控。结果:1.本次试验所提取的h BMSCs在分离、培养及传代等各个阶段的细胞形态学特征均与骨细胞图谱相符合。提取的h BMSCs在培养24h后逐渐贴壁,3天后近乎完成贴壁,12天后逐渐融合至80%-90%左右,出现典型的“铺路石”样改变。贴壁细胞呈长、短梭形、椭圆形等密切生长,有一定方向性,整体呈集落样、漩涡状排列,符合h BMSCs细胞形态学的特点。2.CircRNA-25487的表达水平与h BMSCs成骨增殖、分化之间的关系:（1）茜素红染色结果:经成骨诱导后,Normal组钙化结节数量较ONFH组更加明显;（2）ALP染色结果显示:ONFH组较Normal组ALP活性高;（3）变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA:电泳图结果显示RNA完整性良好;（4）荧光定量PCR检测检测基因表达:扩增相关成骨基因引物如BMP2、Runx2、Osterix、ALP、OPN、GAPDH;（5）QPCR检测c RNA成骨基因:在成骨诱导3、6、8天后,Normal组的BMP2、Runx2、Osterix、ALP、OPN等成骨相关的基因c RNA的表达均高于ONFH组,且差异具有统计学意义（P<0.05）;（6）Western blotting测各组蛋白表达:ONFH组测定的BMP2、Runx2、Osterix、ALP、OPN等相关成骨基因表达均低于Normal组。3.补肾活血药对h BMSCs中CircRNA-25487信号表达水平和成骨分化的影响:（1）茜素红染色结果:诱导剂+FHNHC（400ug/m L）组的钙化结节数量显著高于诱导剂组;（2）ALP染色结果显示:在成骨诱导干预3、6、8天后,诱导剂组的ALP活性均低于诱导剂+FHNHC（400ug/m L）组;（3）QPCR检测CircRNA-25487表达水平:在成骨诱导干预3、6、8天后,诱导剂+FHNHC（400ug/m L）组CircRNA-25487的表达水平明显低于诱导剂组,且差异具有统计学意义（P<0.05）;（4）Western blotting测各组成骨基因的蛋白表达:成骨诱导干预8天后,诱导剂+FHNHC（400ug/m L）组的BMP2、Runx2、Osterix、ALP、OPN等成骨基因的表达水平均显著高于诱导剂组。结论:1.TIONFH患者与股骨颈骨折未坏死患者的h BMSCs成骨增殖、分化能力与CircRNA-25487的表达水平的高低均呈负相关。2.通过茜素红染色、ALP染色观察得出补肾活血中药可以提高h BMSCs的成骨分化能力和成骨活性。3.补肾活血中药可通过调节h BMSCs中CircRNA-25487的表达水平来调控h BMSCs的成骨细胞的增殖、分化能力。