【摘 要】
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目的本研究采用环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）腹腔注射建立小鼠睾丸损伤模型,通过观察针灸治疗前后各组小鼠睾丸组织病理学改变以及睾丸组织中磷酸化组蛋白γ-H2AX及核蛋白Ku70含量的变化,从睾丸细胞DNA损伤可致生精障碍的角度,初步揭示针灸修复CTX所致小鼠睾丸损伤的作用机制。方法选用无特定病原体（SPF）级雄性昆明种（KM）小鼠48只,年龄7周龄。适应性喂养3天后称重,按体重
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目:基于造血微环境及骨髓超微结构的针灸改善CTX化疗小鼠骨髓抑制的机制研究（No.81674080）；
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目的本研究采用环磷酰胺（Cyclophosphamide,CTX）腹腔注射建立小鼠睾丸损伤模型,通过观察针灸治疗前后各组小鼠睾丸组织病理学改变以及睾丸组织中磷酸化组蛋白γ-H2AX及核蛋白Ku70含量的变化,从睾丸细胞DNA损伤可致生精障碍的角度,初步揭示针灸修复CTX所致小鼠睾丸损伤的作用机制。方法选用无特定病原体（SPF）级雄性昆明种（KM）小鼠48只,年龄7周龄。适应性喂养3天后称重,按体重分层随机分组法分为空白组（A）、模型组（B）、针刺组（C）和艾灸组（D）,每组各12只。B、C、D组小鼠以0.02m L/g/只的剂量于每日相同时间依次腹腔注射浓度为5mg/m L的CTX溶液,连续3d,以制备小鼠睾丸损伤模型;作为对照组,A组小鼠依序陪同腹腔注射同等剂量的0.9%Nacl溶液0.02m L/g,连续3d。造模24h之后从每组随机选取1只小鼠处死,剖腹取出睾丸组织,做病理学观察,以验证小鼠睾丸损伤模型成功。模型制备完成后,每天定时定员按序对C、D组小鼠分别给予针刺、艾灸治疗,穴位均选取“大椎”与双侧的“膈俞”、“肾俞”、“足三里”;A、B组小鼠只陪同固定,不给予治疗。每天1次,连续5d。于治疗结束后的次日取材,先从每组随机选取2只小鼠,摘取睾丸组织并用4%中性多聚甲醛固定,以待制成病理切片,进行睾丸组织病理学观察;各组剩余小鼠取出睾丸组织储于-80℃冰箱,以备运用酶联免疫法（ELISA）检测睾丸组织中γ-H2AX与Ku70的含量。采用SPSS 23.0 for Windows对实验数据进行分析。结果1针灸对CTX模型小鼠睾丸组织形态的影响:治疗前,空白组小鼠睾丸组织曲细精管形态结构基本完整,生精细胞层次分明,排列整齐,精子生成状况良好;CTX造模各组小鼠的睾丸组织曲细精管形态多不完整,生精上皮受损严重,生精细胞层数减少,排列紊乱,细胞间隙增大,精子生成情况较差,且部分可见细胞核浓染、空泡变性、核固缩等,有变性空泡细胞及异型细胞形成。治疗5d后,与模型组比,针刺组、艾灸组小鼠睾丸组织曲细精管形态较为完整,生精上皮受损减轻,生精细胞层数相对增多,细胞空泡变性、核固缩等减少,精子生成情况较好,且艾灸组的情况明显好于针刺组。2针灸对CTX模型小鼠睾丸组织中γ-H2AX和Ku70含量的影响:与空白组比,CTX造模各组小鼠睾丸组织中的γ-H2AX和Ku70含量均上升,具有显著性差异（P<0.05）;与模型组比,针刺组与艾灸组γ-H2AX和Ku70含量均有所下降,且具有显著性差异（P<0.05）;与针刺组比,艾灸组中γ-H2AX和Ku70含量均较低,且具有显著性差异（P<0.05）。结论1针刺和艾灸可通过修复生精小管的生精上皮,促使管腔内生精细胞层次增多,且使核固缩、空泡变性等病理表现减少,以改善环磷酰胺所致的小鼠睾丸损伤,促进睾丸组织正常形态结构的恢复。2针刺和艾灸通过下调CTX模型小鼠睾丸组织中γ-H2AX和Ku70的表达,以改善睾丸细胞DNA双链断裂的情况,从而修复CTX所致的睾丸细胞受损的DNA,减轻CTX造成的小鼠睾丸损伤。3针刺和艾灸相比,艾灸下调睾丸组织中γ-H2AX、Ku70表达的作用更显著,进而更有利于修复CTX诱导的睾丸细胞DNA的损伤。
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