第一部分无内毒素SINE RNA的制备目的:基因工程RNA是研究基因表达的关键工具,但使用基因工程大肠杆菌制备的RNA会受到内毒素污染的限制。因此,本研究探讨了一种从基因工程RNA中去除内毒素并保持较高RNA产量的技术方法。方法:将含有小鼠基因组短串联散布核元件（Short interspersed nuclear elements,SINE）B1元件的质粒转化BL21 DE3大肠杆菌,然后从RNA的产量、纯度、内毒素的含量以及B1 RNA的含量方面评估了四种RNA提取方法（SDS-Na Cl过滤法、SDS-Na Cl离心法、TRIzol提取法和SDS-热酚提取法）。发现这四种RNA制备方法中,SDS-Na Cl过滤法,可有效去除内毒素,并获得较高的RNA产量。因此,在SDS-Na Cl过滤法的基础上,又使用Triton X-114进一步去除内毒素。在Triton X-114去除内毒素的系统中,比较了不同浓度的乙酸钠（Na Ac）、不同浓度的磷酸缓冲液（phosphate buffer,PB）以及PB溶液的不同p H值对内毒素去除效率的影响。使用最终确定的提取方法制备RNA,进行兔热原实验,观察是否引起兔的发热。结果:本文的研究结果显示SDS-Na Cl过滤法提取的RNA中内毒素含量最低（P<0.05）,是SDS-热苯酚提取RNA中内毒素含量的1/100,是SDS-Na Cl的1/10,是TRIzol提取法的1/6。另外,SDS-Na Cl过滤法提取的基因工程RNA中纯B1 RNA的含量也较高,是TRIzol提取法的3.44倍。在SDS-Na Cl过滤法的基础上,又使用Triton X-114进一步去除内毒素,发现0.1M PB（p H 6.5）比用Na Ac作为介质去除内毒素的效率更高,RNA产量也更高。此外,本方法制备的基因工程RNA没有引起新西兰兔发热。结论:SDS-Na Cl过滤法结合Triton X-114相分离（0.1M PB,p H 6.5为介质）,可明显去除基因工程大肠杆菌SINE RNA中的内毒素,而保证较高的RNA产量,同时本方法制备的RNA内毒素量符合《中华人民共和国药典》2010年版热原检查法（兔法）的规定。第二部分Alu RNA影响人晶状体上皮细胞ROS的分子机理目的:晶状体的老化、氧化应激和晶状体蛋白修饰是诱发白内障的主要因素。Alu RNA在氧化应激时增多,体外转染靶向Alu RNA的反向寡核苷酸可预防年龄相关性黄斑变性的发生。因此,在本研究中探讨体外转染Alu RNA对白内障细胞模型的影响。丙酮醛（Methylglyoxal,MGO）处理的人晶状体上皮细胞（Human lens epithelial cells,HLECs）是研究白内障常用的细胞模型。根据本课题第一部分的研究,利用SDS-Na Cl过滤结合Triton X-114相分离（0.1M PB,p H 6.5为介质）,制备出了人源化的SINE RNA（Alu RNA）,包括Alu正义RNA（Alu RNA）和Alu反义RNA（Aluas RNA）,将这些RNA转染HLECs,研究Alu RNA以及Aluas RNA影响丙酮醛引起的HLECs中活性氧的分子机理。方法:使用磷酸钙转染法,分别用Aluas RNA、Alu RNA、t RNA（无关RNA对照）或磷酸钙转染试剂转染HLECs细胞。转染后,用不同浓度的MGO处理HLECs。收集细胞,采用细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit–8,CCK-8）检测细胞活力;采用calcein-AM/PI双染色试剂盒检测细胞存活/死亡;采用活性氧（Reactive oxygen species,ROS）检测试剂盒检测细胞内ROS水平;逆转录实时定量PCR（RT-q PCR）检测核因子E2相关因子2（Nuclear factor erythroid 2 related factor,Nrf2）、Kelch样ECH关联蛋白1（kelch like ECH associated protein 1,Keap1）的m RNA表达,-△△CT法分析实验数据。结果:MGO随着其浓度的上升,提高了HLECs细胞的死亡率和ROS的生成量。研究的结果发现Aluas RNA与Alu RNA、t RNA和CPT试剂相比,能够减少MGO诱导的ROS水平,并降低HLECs的死亡率,同时,Aluas RNA能够增加Nrf2 m RNA表达水平,降低Keap1 m RNA的表达。结论:Aluas RNA通过激活与白内障相关的Nrf2/Keap1通路,减少MGO引起的HLECs细胞中的ROS,并减少细胞死亡。