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目的:法医检案经常遇到纠纷过程中情绪应激或轻度外伤后快速死亡的案例,部分经系统尸检无明确致死性的疾病或损伤,死亡原因常被鉴定为死因不明或心源性死亡,此类案件因缺乏特异性病理形态学诊断指标致使鉴定意见存在争议,往往启动多次重新鉴定致案件久拖不决造成不良社会影响。冠状动脉痉挛（Coronary Artery Spasm,CAS）是冠脉局部持续性的过度收缩,轻者仅以心绞痛、心律失常为主要表现;重者或累及多支冠脉持续性、不可逆痉挛时则可引发心肌梗死甚至猝死。目前认为CAS可能是轻微外伤后心源性死亡（Sudden Cardiac Death,SCD）的重要机制之一,筛选CAS相关的确切、可靠的法医病理学诊断标记物极为重要。目前认为CAS是多因素诱导的急性冠状动脉过度收缩综合征,而血管平滑肌的异常兴奋性增高和内皮功能障碍导致的血管舒缩因子释放失衡是引起血管收缩高反应性的原因,其中尤以前者更为重要。近年研究发现平滑肌细胞的表型可影响细胞自身收缩能力。因此,本研究在不同死因的尸检案件中,通过检测冠状动脉平滑肌细胞收缩高反应性通路相关蛋白及平滑肌细胞收缩表型蛋白的变化,探讨其在冠脉痉挛诱发心源性死亡中的作用,以期探讨其作为冠脉痉挛诊断标记物的可行性。方法:本实验选取河北医科大学法医鉴定中心2016-2020年案例54例,其纳入标准为所有案例解剖距死亡时间为6天以内。其中,冠脉管腔狭窄<50%、死因明确、非心源性死亡案例30例,为对照组;冠脉管腔狭窄<50%、生前遭受轻微外伤或强烈情绪应激、排除其他心肌病、死因为心源性死亡案例9例,为轻度硬化的SCD组;冠脉管腔狭窄>50%、生前遭受轻微外伤或强烈情绪应激、死因为冠心病急性发作的案例15例,为严重硬化的SCD组。采用HE染色、Masson染色及EVG染色,观察冠状动脉的形态学变化;采用免疫组织化学染色技术观察冠状动脉平滑肌收缩高反应性通路蛋白p CPI-17、MLC、p MLC（S20）以及平滑肌细胞收缩表型蛋白α-SMA的表达情况。结果处理及统计分析:采用SPSS21.0统计软件进行统计学分析,所有数据为计量资料,采用均数±标准差（Mean±SD）表示。对于各组均数的比较,当方差齐时,通过单因素方差分析（one-way ANOVA）,并采用Tukey post hoc test进行两两间的比较;当方差不齐时,通过非参数Kruskal–Wallis检验,并采用Dunn’s multiple comparison test法进行两两间的比较。所有统计结果均以P<0.05作为有统计学差异。结果:1.HE染色结果示:对照组血管组织结构完整,内皮光滑且完整连续,内膜增厚不明显,中膜结构正常,管腔狭窄<50%,未见硬化或轻度硬化;轻度硬化的SCD组血管组织结构较完整,内皮较光滑且仍保持其完整性及连续性,内膜增厚程度较低,中膜结构正常,未发生严重挤压变薄现象,管腔狭窄<50%;严重硬化的SCD组血管组织结构紊乱,内皮不光滑,其完整性、连续性遭到破坏,内膜增厚伴有明显粥样斑块,可见大量泡沫细胞的浸润及胆固醇结晶,中膜被增厚的内膜结构挤压,薄厚不一,局部变薄深染,管腔狭窄>50%。2.Masson染色结果示:Masson染色可将胶原纤维染成蓝色,肌纤维、纤维素和红细胞染成红色。对照组中胶原纤维丰富和平滑肌细胞相互交织,着色均匀;轻度硬化的SCD组内膜斑块处胶原纤维含量较多、范围较广;严重硬化的SCD组内膜斑块处胶原纤维含量明显减少,甚至几乎缺失。轻度硬化的SCD组和严重硬化的SCD组局部平滑肌所呈现的红色致密深染,局部厚度减少,以严重硬化的SCD组更为显著。3.EVG染色结果示:EVG染色可将弹性纤维染成紫黑色,胶原纤维染成红色,背景为黄色。对照组内外弹力膜结构连续,染色致密,内弹力膜呈波浪状,中膜散在弹力纤维,排列有序且紧密;轻度硬化的SCD组内弹力膜断裂缺失,外弹力膜结构完整,中膜弹力纤维较多;严重硬化的SCD组内外弹力膜明显减少,失去连续性,且染色变浅,中膜层弹力纤维稀疏甚至缺失。4.免疫组织化学染色结果示:4.1 pCPI-17免疫组织化学染色:p CPI-17为平滑肌细胞收缩高反应性通路相关蛋白,主要表达于平滑肌细胞胞浆内。轻度硬化的SCD组与严重硬化的SCD组分别与对照组相比无差异;轻度硬化的SCD组与严重硬化的SCD组两组比较无差异。4.2 MLC免疫组织化学染色:MLC为平滑肌细胞收缩相关蛋白,主要表达于平滑肌细胞胞浆内。轻度硬化的SCD组与严重硬化的SCD组分别与对照组相比均无差异;而轻度硬化的SCD组与严重硬化的SCD组比较有显著性差异（P<0.05）,轻度硬化的SCD组平均阳性强度较高。4.3 pMLC（S20）免疫组织化学染色:p MLC（S20）为平滑肌细胞收缩相关蛋白,主要表达于平滑肌细胞胞浆内,其表达强度与收缩强度呈正相关。轻度硬化的SCD组、严重硬化的SCD组分别与对照组相比具有显著差异（P<0.05）,平均阳性强度均高于对照组,;而轻度硬化的SCD组与严重硬化的SCD组两组间比较无差异。4.4α-SMA免疫组织化学染色:α-SMA为平滑肌肌动蛋白,是平滑肌细胞收缩表型的特征性标记蛋白,主要表达于平滑肌细胞胞浆内。轻度硬化的SCD组与对照组相比有显著性差异（P<0.05）,轻度硬化的SCD组平均阳性强度较高;严重硬化的SCD组与对照组相比无显著性差异;轻度硬化的SCD组与严重硬化的SCD组相比无显著性差异。结论:1、冠状动脉轻度硬化时平滑肌细胞具有较高的收缩储备能力,可能是情绪应激或轻微外伤后冠状动脉痉挛乃至心源性死亡的机制。2、pMLC（S20）、α-SMA等平滑肌收缩相关蛋白有望作为冠脉痉挛致心源性死亡的诊断标记物。