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目的:通过观察脱细胞真皮基质(Acellular dermal matrix,ADM)联合浓缩生长因子(Concentrated growth factors,CGF)对兔全层皮肤缺损的修复效果,为脱细胞真皮基质联合自体浓缩生长因子在临床中的使用提供实验依据。方法:1.选取新西兰大白兔12只,在兔背部脊柱两侧各做三个长宽为2cm×1cm的全层皮肤缺损至皮下筋膜层,共计72个缺损,分别为A组:ADM+CGF组、B组:ADM组、C组:空白对照组,每组24个缺损。2.制备浓缩生长因子(CGF)。3.标本采集及处理:分别在造模后1、2、3、4周随机选取3只兔子,处死后,在创缘以外0.5cm处,切取全层皮肤及皮下组织,立即置入4%多聚甲醛溶液中固定。4.大体观察:在采集动物皮肤组织标本前观察伤口情况,对创口愈合率进行统计和分析。5.HE染色组织学观察,测量组织厚度:光镜下观察表皮层和真皮层的炎细胞、成纤维细胞、新生血管的数量以及胶原纤维的排列;测量各时间节点每组的新生组织厚度。6.天狼星红染色组织学观察:使用偏振光显微镜分辨不同的纤维类型,Ⅰ型胶原纤维粗大,呈黄色或红色;Ⅲ型胶原纤维纤细,呈绿色。采用Image Pro-Plus6.0测定创口皮肤中Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维比例。7.TGF-β1、VEGF免疫组织化学染色,采用Image Pro-Plus 6.0观察TGF-β1、VEGF的表达,分析平均光密度。8.统计学处理:数据采用SPSS 21.0分析软件,用均数±标准差表示,使用单因素方差分析,方差齐时用LSD法对实验组进行组间两两比较;方差不齐时用Tamhane法进行组间两两比较,P<0.05具有统计学意义。结果:1.大体观察:术后一周,A、B组愈合良好,表面清洁干燥,部分缝线松脱,C组伤口表面充满肉芽组织,可见少量渗血及脓性分泌物。术后二周,A组愈合良好平整;B组伤口稍凹陷;C组伤口凹陷明显,轮廓不整齐。术后三、四周,A、B、C组大部分已愈合,A、B组愈合质量较好,有毛发生长,C组可触及増生性组织,质韧,无毛发生长。2.HE组织学观察:术后一周,A组上皮层初步形成,可见未降解的ADM及CGF,真皮层可见大量炎症细胞,成纤维细胞,胶原纤维纤细,排列整齐,有较多新生血管形成;B组上皮层部分形成,可见未降解的ADM,较多炎细胞浸润及少量新生血管生成;C组上皮层未形成,有大量炎症细胞和少量的新生血管形成,与正常组织交界处可见明显凹陷;A、B、C组的上皮厚度与正常组相比均有统计学意义(P<0.05),A组与B组相比无统计学意义(P>0.05),A、B组与C组相比均有统计学意义(P<0.05)。二周时,A组上皮层基本形成并有清晰的分层结构,成纤维细胞数量多,形成的胶原纤维束细小且排列较整齐,少量皮肤附属器生成;B组上皮分层结构逐渐清晰,新生胶原纤维细小且疏松,暂无皮肤附属器生成;C组表皮初步形成,与正常皮肤交界处仍有凹陷,胶原纤维不规则排列;A、B、C组的上皮厚度与正常组相比均有统计学意义(P<0.05),A组、B组、C组之间的上皮厚度相比均有统计学意义(P<0.05)。三周、四周时,A、B、C组创口均愈合,A组、B组的上皮层基本平坦与正常组织相近,上皮组织结构基本成熟。C组的上皮分层结构逐渐清晰,依然可见大量炎症细胞和成纤维细胞,胶原纤维粗大,排列致密杂乱,未形成明显的皮肤附属器。其中三周时,A、B、C组的上皮厚度与正常组相比均有统计学意义(P<0.05),A组、B组、C组之间的上皮厚度相比均无统计学意义(P>0.05)。四周时,A组的上皮厚度与正常组相比无统计学意义(P>0.05);B、C组与正常组相比均有统计学意义(P<0.05);A组、B组、C组之间的上皮厚度相比均无统计学意义(P>0.05)。3.天狼星红染色的组织学观察:一周时,A、B组新生的胶原纤维以Ⅲ型为主,C组主要以Ⅰ型胶原纤维为主,A、B组与C组的Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维比例相比均有统计学意义(P<0.05),A组与B组间无统计学意义(P>0.05),A组、B组与正常组织间无统计学意义(P>0.05);二周时,A组、B组、C组之间的Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维比例均有统计学意义(P<0.05),A组与正常组织之间无统计学意义(P>0.05);三、四周时,A、B组与C组的Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维比例相比有统计学意义(P<0.05),A组与B组相比无统计学意义(P>0.05),与正常组织相比无统计学意义。4.TGF-β1的表达分析结果:1、2周时,A、B、C三组两两比较均有统计学意义(P<0.05),并与正常组织相比也均有统计学意义(P<0.05),其中表达量A组>B组>C组;3周时,A、B、C三组两两比较均有统计学意义(P<0.05),并与正常组织相比也均有统计学意义(P<0.05),此时C组的TGF-β1表达量最高;4周时,A、B、C三组两两比较均有统计学意义(P<0.05),A组与正常皮肤相比无统计学意义(P>0.05),B、C两组数据与正常皮肤相比均有统计学意义(P<0.05)。5.VEGF的表达分析结果:1周时,A、B、C三组两两比较均有统计学意义(P<0.05),A组与正常皮肤相比无统计学意义(P>0.05),B、C组与正常皮肤相比均有统计学意义(P<0.05);2周时,A、B、C三组两两比较均有统计学意义(P<0.05),A、B、C三组数据与正常皮肤相比也均有统计学意义(P<0.05);3、4周时,A、B、C三组之间无统计学意义(P>0.05),A、B、C三组数据与正常皮肤相比也均无统计学意义(P>0.05)。结论:1.ADM联合CGF修复兔皮肤全层缺损,可加快创口愈合速度。2.ADM联合CGF可以增加上皮厚度。3.ADM联合CGF在皮肤缺损早期可增加创口局部组织的胶原纤维,在后期可减小Ⅰ/Ⅲ型胶原纤维的比例,减少瘢痕形成,改善创口的愈合质量。4.ADM联合CGF在皮肤缺损愈合的过程中可以增加VEGF的释放,促进新生血管的生成。5.ADM联合CGF在皮肤缺损愈合的早期(1、2周)显著增加TGF-β1的释放,在3、4周时稳定调节TGF-β1的释放以利于伤口的愈合。