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乳腺癌是我国女性常见的一种恶性肿瘤,其死亡率仅次于肺癌而位居第二位,且发病率呈直线上升趋势。近日中国抗癌协会公布了最新统计数据,中国妇女乳腺癌死亡率正以3%的速度增长,乳腺癌成为女性健康的头号杀手。紫杉醇是乳腺癌化疗中最具活性的药物之一,单药和联合用药均显示很好的疗效。紫杉醇已应用于乳腺癌的临床治疗,一般认为紫杉醇能增强微管聚合,稳定微管防止解聚,使有丝分裂停滞在G2/M期,从而阻断正常的有丝分裂和细胞增殖;除此之外,紫杉醇可以直接在细胞信号和基因表达上发挥作用,活化多种凋亡相关基因的表达,从而引发细胞凋亡。但紫杉醇诱导肿瘤细胞凋亡的分子机制还不十分清楚,而且它作用于不同类型细胞机制也有所不同。本实验采用体外培养的乳腺癌MCF-7细胞,经不同时间和不同浓度的紫杉醇处理后,通过DNA梯度电泳检测细胞的凋亡情况;应用RT-PCR和免疫蛋白印迹的方法检测Fas/FasL信号通路中凋亡相关基因的mRNA和蛋白的表达变化。探讨紫杉醇诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡与Fas/FasL信号通路的关系,为进一步阐明紫杉醇诱导乳腺癌细胞凋亡分子机理提供实验依据。实验结果:1、DNA凝胶电泳结果显示,紫杉醇可以诱导MCF-7细胞发生凋亡,并且随着时间推移和药物浓度的增加凋亡加剧,提示紫杉醇诱导MCF-7细胞凋亡具有明显的时间剂量依赖性。2、RT-PCR结果显示:在MCF-7细胞中,随紫杉醇浓度的增加Fas、FasL、FADD、Caspase-8、Caspase-10、Caspase-3基因mRNA水平有所上调,DR4、DR5mRNA水平随药物浓度的增加没有发生明显的变化。3、Western-blot结果显示:随着紫杉醇浓度的增加,Fas、FasL蛋白表达量逐渐增加,Caspase-8、Caspase-3酶原蛋白表达量逐渐减少。通过以上结果可以推断紫杉醇诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡与Fas/FasL信号通路有关,而DR4、DR5并没有参与这一过程。