鸭瘟病毒囊膜糖蛋白gE胞内域和胞外域对病毒毒力及免疫效力的影响

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鸭瘟是一种急性、败血性传染病,其病原为鸭瘟病毒(Duck plague virus,DPV)。目前关于DPV囊膜糖蛋白gE(gE)胞内域、胞外域对病毒毒力及免疫效力的影响还未见报道,本文通过构建鸭瘟gE胞内域、胞外域缺失病毒对其进行评估,获得以下结果:1.gE胞外域和gE胞内域缺失病毒的构建及遗传稳定性通过细菌人工染色体重组鸭瘟病毒拯救系统平台和Red同源重组技术获得去除gE胞外域的DPV CHv-BAC-gEΔET病毒和去除gE胞内域的DPV CHv-BAC-gEΔCT病毒。在此基础上回复UL23基因,再通过拯救、挑斑纯化分别得到了去除BAC序列、仅缺失gE胞外域和胞内域的DPV CHv-gEΔET和DPV CHv-gEΔCT病毒。将MOI=0.01的DPV CHv-gEΔET、DPV CHv-gEΔCT和亲本病毒CHv-50株分别接种鸭胚成纤维细胞(DEF)。病毒滴度测定结果表明,DPVCHv-gEΔET、DPV CHv-gEΔCT缺失病毒与亲本病毒具有相似的增殖规律。与亲本病毒相比,gE胞外域、胞内域缺失病毒在感染DEF后72 h,滴度分别下降了约80倍和25倍,表明gE胞外域、胞内域缺失均会影响病毒在DEF细胞上的增殖。DPV CHv-gEΔET、DPV CHv-gEΔCT在DEF细胞上连续传20代,在雏鸭体内连续传10代,通过PCR鉴定、病毒毒价测定和对易感动物的致病性确定缺失病毒的遗传稳定性。结果表明,缺失病毒稳定、未发生回复突变,对易感动物的致病性未发生明显变化,即gE胞外域、胞内域缺失株具有良好的遗传稳定性。2.DPVCHv-gEΔET和DPVCHv-gEΔCT对雏鸭致病性和免疫效力将DPV CHv-gEΔET、DPVCHv-gEΔCT、DPV CHv-ΔgE和亲本病毒CHv-50分别以104、105、106TCID50/只,肌注14日龄鸭(设空白对照),观察10 d。结果亲本病毒CHv-50 105和106TCID50组鸭出现体温升高,死亡率分别为50%和60%;DPVCHv-gEΔCT 105、106TCID50组鸭均出现20%死亡;DPVCHv-gEΔET、DPV CHv-ΔgE组均未出现体温升高或死亡。DPV CHv-ΔgE和DPVCHv-gEΔET组10 d鸭血清中均可检测到DPV特异性抗体。结果表明,与亲本病毒相比,gE胞内域缺失可使DPV对雏鸭的毒力有所降低,gE胞外域缺失可使DPV对雏鸭的毒力显著降低,可诱导鸭产生特异性血清抗体。DPVCHv-gEΔET和DPV CHv-ΔgE参考1羽份鸭瘟活疫苗(107.7copies/只)免疫14日龄鸭,免疫后7 d可检测到中和抗体,在7~28 d抗体水平不断升高。接种14 d后用100LD50CHv强毒攻击,DPVCHv-gEΔET和DPVCHv-ΔgE组雏鸭全部存活,而对照组全部死亡。表明DPVCHv-gEΔET和DPVCHv-ΔgE可有效诱导鸭机体产生保护性免疫应答,对100LD50剂量的CHv强毒攻击能达到100%的保护。综上,DPVgE胞外域、胞内域缺失均可降低病毒对雏鸭的致病性,以gE胞外域对毒力的影响更大;DPVgE缺失、gE胞外域缺失病毒均能够刺激鸭产生中和抗体抵抗强毒攻击。
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