芦丁对过氧化氢诱导下人黑素细胞抗氧化抗凋亡作用的研究

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目的白癜风是一种发病率较高的获得性皮肤粘膜色素脱失性疾病,黑素细胞的凋亡是白癜风发生发展的基础,而黑素细胞受到氧化应激是其凋亡的重要原因。因此抑制氧化应激对黑素细胞的损伤和凋亡,对白癜风的治疗有重要意义。芦丁作为天然抗氧化剂具有强大的抗氧化能力。本实验我们将建立黑素细胞氧化损伤模型,探讨芦丁对过氧化氢诱导下正常人表皮黑素细胞系PIG1细胞抗氧化抗凋亡的作用,为治疗白癜风提供新方向。方法1.MTS法检测H2O2和芦丁单独作用及联合作用对PIG1细胞和原代人黑素细胞增殖活性的影响。2.荧光显微镜观察芦丁对H2O2诱导下PIG1细胞ROS的影响。3.WST-8法检测芦丁对H2O2诱导下PIG1细胞SOD的影响。4.TBA法检测芦丁对H2O2诱导下PIG1细胞MDA的影响。5.Western Blot检测芦丁对H2O2诱导下PIG1细胞Bcl-2、Bax、pro Caspase-3、Cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果1.PIG1细胞经浓度为0.6 mmol/L的H2O2处理24h后,PIG1细胞增殖活性显著下降(P<0.05);原代人黑素细胞经浓度为0.4 mmol/L的H2O2处理24h后,原代人黑素细胞增殖活性显著下降(P<0.05)。2.PIG1细胞和原代人黑素细胞经浓度为5、10、20、40、80μmol/L的芦丁处理24h后,两种黑素细胞的增殖活性显著上升(P<0.05)。3.实验组芦丁预处理浓度为10、20、40、80μmol/L,预处理PIG1细胞和原代人黑素细胞24 h,H2O2再处理24 h,结果实验组各组细胞的增殖活性明显低于对照组(P<0.05),但均高于过氧化氢组(P<0.05),表明芦丁的预处理对H2O2损伤两种黑素细胞的增殖活性有抑制作用。4.实验组芦丁预处理浓度为10、20、40μmol/L,预处理PIG1细胞24 h,H2O2再处理24 h,结果实验组各组的荧光强度均低于过氧化氢组,并且随着芦丁预处理浓度的升高荧光强度逐渐下降,反映PIG1细胞内ROS水平随着芦丁浓度的升高而逐渐降低。5.实验组芦丁预处理浓度为10、20、40μmol/L,预处理PIG1细胞24 h,H2O2再处理24 h,结果发现实验组各组的SOD活性均高于过氧化氢组,并且随着芦丁预处理浓度的升高而升高(P<0.05);实验组各组的MDA含量均低于过氧化氢组,并且随着芦丁预处理浓度的升高而降低(P<0.05)。6.实验组芦丁预处理浓度为40μmol/L,预处理PIG1细胞24 h,H2O2再处理24h,结果发现实验组Bcl-2、pro Caspase-3蛋白表达高于过氧化氢组(P<0.05),Bax、Cleaved Caspase-3蛋白表达低于过氧化氢组(P<0.05)。结论1.PIG1细胞和原代人黑素细胞的增殖活性随H2O2浓度的升高而下降。2.芦丁在一定浓度范围内对PIG1细胞和原代人黑素细胞无明显毒性,而且可以促进这两种黑素细胞的增殖活性。3.芦丁能抑制H2O2诱导下PIG1细胞的氧化损伤,减少ROS产生,降低MDA含量,激活SOD活性。4.芦丁能抑制H2O2诱导下PIG1细胞的凋亡,与减少Bax/Bcl-2的比值,减少Caspase-3蛋白的裂解激活有关。
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