人β-防御素3基因转染和金纳米颗粒在体内体外的抗炎和成骨作用研究

来源 :南京大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:thangna9806
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
[目的]体外实验观察人β-防御素3(human β-defensin3,hBD3)基因转染对人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,hPDLCs)生物学特性、抗炎和炎症微环境下成骨作用的影响;加入金纳米颗粒(gold nanoparticles,AuNPs)对转染后炎性微环境下hPDLCs成骨作用的影响及其可能机制。体内试验观察转染了hBD3基因,并经AuNPs处理后的SD大鼠牙周膜细胞(SD rat periodontal ligament cells,rPDLCs)局部注射后对SD大鼠慢性牙周炎形成的影响并讨论可能机制。[方法]体外实验中,以携带hBD3基因的重组腺病毒载体(Ad-hBD3)体外转染hPDLCs并加入AuNPs处理细胞,观察两者对hPDLCs活性的影响。大肠杆菌脂多糖(Escherichia coli-LPS,E.coli-LPS)构建炎性微环境后,酶联免疫法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测细胞上清中炎症因子的表达来观察细胞的炎症反应;之后进行成骨诱导培养,分别观察单独转染hBD3基因和加入AuNPs处理后对hPDLCs成骨相关蛋白表达和成骨分化的影响。转染并用AuNPs处理细胞12h后western blot分别检测p38和p-p38蛋白的表达情况。加入p38抑制剂SB203580(10μM)后进行成骨诱导,以探讨成骨相关蛋白的表达和成骨分化过程是否与p38 MAPK通路相关。体内实验部分,培养并鉴定大鼠牙周膜细胞(rat periodontal ligament cells,rPDLCs)后选取p3-p5 代细胞转染hBD3基因后,按照不同分组加或不加AuNPs刺激,留取细胞备用。选择4周龄雌性SD大鼠,按照分组用浸泡牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,P.g)的丝线结扎双侧上颌第二磨牙用于构建实验性牙周炎模型,并在相应牙位的腭侧牙龈近中,中间,远中三个区域注射生理盐水或生理盐水重悬的细胞悬液。处死后通过ELISA法、Micro-CT、免疫组化等检测方法探讨SD大鼠慢性牙周炎形成过程中的变化,并观察各组间差异。[结果]hBD3转染进入hPDLCs后在mRNA和蛋白水平均可以成功表达;转染并加入AuNPs后对细胞活性无明显负面影响。ELISA结果显示在E.coli-LPS刺激下,转染后细胞中炎症因子分泌量明显减少,之后加入AuNPs不能进一步显著下调炎症因子的分泌;转染并加入AuNPs后qPCR和Western Blot结果显示成骨诱导7天后与对照组相比,实验组成骨相关mRNA和蛋白表达显著增加。7天的ALP染色,ALP活性检测和21天的ARS染色结果均表明实验组细胞成骨分化能力明显高于对照组。转染后加或不加AuNPs处理12h后,实验组p-p38蛋白的表达情况明显高于对照组。加入抑制剂SB203580(10μmol/L)进行成骨诱导后,实验组7天的成骨相关mRNA和蛋白表达、ALP染色以及ALP活性检测结果,21天的ARS染色和半定量结果均显著低于对照组。体内试验中,处死当日大鼠血清ELISA结果表明实验组炎性因子分泌量显著低于对照组,处死后取材上颌骨Micro-CT结果显示实验组牙槽骨吸收水平以及骨密度等指标显著优于对照组、免疫组化结果也表明实验组骨破坏程度轻于对照组,且实验组p-p38表达高于对照组。[结论]在E.coli-LPS刺激下,转染了 hBD3基因的hPDLCs的炎症反应被显著抑制,但AuNPs对此过程无显著作用。炎性微环境下,hBD3基因转染能明显提高hPDLCs的成骨相关基因和蛋白表达,AuNPs的加入能进一步促进表达,转染并加入AuNPs还有利于hPDLCs的成骨分化过程。这些都可能与p38 MAPK通路的激活相关。SD大鼠慢性牙周炎建模过程中,局部注射hBD3基因转染并经AuNPs处理后的rPDLCs能影响慢性牙周炎的形成,一定程度上降低炎症反应并减少牙槽骨的破坏,p38 MAPK通路可能也参与此过程。
其他文献
课文辅助系统作为历史教科书的重要组成部分,包含导入系统、阐释系统和巩固系统,这三个系统在历史教学中的作用不可或缺。导入系统开宗明义、提纲携领;阐释系统多种多样、图文并茂的表现形式,能帮助学生加深对课文内容的认识和理解;以课后习题形式出现的巩固系统有助于稳固学生对新知识的掌握程度。除此之外,课文辅助系统在培养学生的唯物史观、时空观念、史料实证、历史解释和家国情怀等历史学科核心素养方面也起着重要作用。
财产保险业作为社会经济发展的稳定器与助推器,对提高风险抵御能力、维持社会秩序、促进资本流通方面发挥着巨大作用。但是客户投诉率持续居高不下,不仅影响行业形象,而且对于保险市场的发展也存在不稳定风险。同时,各家保险公司也面临着客户的不信任,监管部门的严格要求,以及市场竞争压力的不断升级。客户投诉作为客户抱怨的最直接表达方式,补救措施是否得当,会对企业的声誉、口碑产生直接影响与深刻作用。特别是在当今万物
锂离子电池由于其能量密度高、循环性能好等优点而广泛应用于电动车和通讯领域,产量逐年提高,对日常生活具有重大的影响。达到使用寿命后被废弃的锂离子电池如果通过固化深埋或者存放于废矿井处理,其中含有的Ni、Co等有价金属和外壳等材料会造成巨大的资源浪费,有毒物质会造成严重的环境污染,因此,对于锂电池的各组成部分进行回收与再利用就尤其必要。因此,本课题对锂电池中的镍钴锰酸锂(简称为“三元”)正极材料的回收
地质聚合物是一种新型的绿色凝胶材料,以高硅铝质天然矿石或工业废弃物为原料,通过化学激发而形成的无机聚合材料。地质聚合物相比于传统硅酸盐材料而言,具有价格低廉、生产工艺简单、环保低能、耐久性好、耐腐蚀性好、力学性能好等优良特征。在生活中可应用的范围广泛,可用作房屋建筑材料和混凝土路面材料,防火阻燃材料、多孔材料等领域。地聚物的形成及其力学性受诸多条件的影响,如碱激发剂种类及浓度、原材料种类、养护条件
党的十八大中提出了“美丽中国”这一概念,之后不断地强调生态文明建设的重要性。国家领导人指出生态文明建设对于中华民族未来的发展是至关重要的,要在国家建设的各个方面和全过程融入生态文明这一理念。近年来我国也在法律层面对环境问题进行规制,以此助力生态中国、美丽中国的建设。1997年《刑法》中首次规定了“重大环境污染事故罪”,2011年出台的《刑法修正案(八)》以“污染环境罪”替换了原来的“重大环境污染事
为了考察褶皱高宽比、褶皱层数和褶皱偏移角度对玻璃纤维/环氧树脂基复合材料层合板拉伸性能的影响,参考ASTM D 3039开展了无损伤和含有不同类型褶皱缺陷的玻璃纤维复合材料
近年来,互联网飞速发展,随之而来的是信息量的激增,每天都会产生大量数据,而我们不可能一一浏览所有的信息,因此,如何才能充分利用这些数据,从中挖掘出用户可能比较关注的信
在我国,随着人们生活水平的提高,代谢综合征的患病率逐年提高。代谢综合征是指一个个体同时存在肥胖、高血压、高血糖、血脂异常等多种心血管疾病危险因素,将给个人和社会带来沉重的社会负担和经济压力。先前的研究表明,多糖作为一种膳食纤维具有多种生物学活性,如抗氧化、免疫调节、抗肿瘤、抗凝血、抗病毒等,多糖能够有效改善机体健康,抑制代谢综合征的发生与发展,但其对高脂饮食诱发的代谢综合征的调节机制尚不十分清晰。
肺癌是一种常见的恶性肿瘤,是全世界范围内癌症相关死亡的第一大原因,在中国,肺癌发病率的占比已相当于发达国家水平,而非小细胞肺癌(NSCLC)患者约占所有肺癌患者病例的85%。大量证据表明,在肿瘤发生、发展和转移的过程中,某些基因的异常表达起着非常重要作用,因此,找到非小细胞肺癌发生发展过程中的异常表达基因,以及相关联的一些信号通路,可以为非小细胞肺癌基因层面的治疗提供潜在的靶标。本实验的目的是利用
随着市场竞争日趋激烈,产品愈加复杂,协同设计已经成为主流的产品研发模式。协同设计本质上是“智力协同”,参与者能否充分分享和利用团队拥有的信息是顺利推进协同设计的关