帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是一种多发于中老年人群的神经退行性疾病。PD患者脑内的特征性标志物是出现以α-突触核蛋白(α-synuclein,SNCA)为主要成分的路易小体。越来越多的证据表明表观遗传修饰在PD的发展进程中扮演了重要的角色,如DNA甲基化修饰、组蛋白乙酰化修饰和染色质重塑等。N6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m6A)RNA甲基化修饰广泛存在于各种真核生物的m RNA以及其他非编码RNA中,可能参与RNA的转录、加工、翻译、降解等过程。目前关于RNA甲基化修饰在PD发病过程中的作用仍不明确,研究显示m6A去甲基化酶FTO能够引起细胞内线粒体功能障碍和加剧氧化应激导致神经元细胞凋亡。本课题主要对m6A RNA甲基化修饰调控PD关键蛋白(α-synuclein)表达的分子机制进行研究。本研究首先构建了稳定敲低m6A去甲基化酶FTO或ALKBH5的PC12细胞系,同时采用m6A甲基化抑制剂(环亮氨酸)处理细胞,结果表明在细胞内改变m6A RNA甲基化修饰的含量后会显著抑制SNCA的转录和翻译水平。其次,本研究通过在线预测和免疫沉淀法研究SNCA m RNA上m6A的修饰位点;敲低m6A识别蛋白YTHDF2,探究m6A修饰对α-synuclein表达的影响,结果显示在SNCA m RNA的CDS区存在两个m6A位点,敲低去甲基化酶后可能直接减少SNCA基因的表达,而进一步敲低YTHDF2后,α-synuclein的表达得到恢复并增加,说明m6A调控α-synuclein的表达是通过YTHDF2促使其降解来实现的。最后,通过检测细胞内外α-synuclein表达量的不同,本文探究了m6A对细胞自噬及其信号通路AKT/m TOR的影响,实验结果显示,敲低FTO和ALKBH5后,p-AKT和p-m TOR蛋白表达增加而自噬标志蛋白LC3Ⅱ表达减少,p62表达增加,说明增强m6A甲基化可以激活AKT/m TOR通路,从而抑制细胞自噬活性,最终调控α-synuclein的转移和胞外释放。综上所述,m6A RNA甲基化修饰可以通过识别蛋白YTHDF2调控SNCA m RNA的稳定性从而抑制其表达,并通过影响AKT/m TOR信号通路来抑制细胞自噬的发生,进一步影响α-synuclein的胞外分泌。本研究揭示了m6A RNA甲基化修饰调控帕金森病关键蛋白(α-synuclein)表达的分子机制,为RNA表观遗传修饰对于帕金森病发病机制及其治疗提供支持和借鉴意义。