芽孢杆菌生长代谢及产纤维素酶的发酵优化

来源 :大连理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nj_wpp1
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芽孢杆菌是一类广泛使用的功能微生物,绝大部分是好氧型细菌,生长代谢快,分布广,能形成芽孢,具有较强胁迫耐受性与环境适应性,存活率较高。同时,芽孢杆菌还可以分泌纤维素酶、蛋白酶、淀粉酶等多种复合酶系,在农业、食品行业领域具有广泛应用,目前国内外学者利用天然芽孢杆菌产纤维素酶的研究较少,多将研究重点放在改造菌高产纤维素酶,然而工程菌株的性能通常不稳定,因此很少应用于工业生产。本文选用枯草芽孢杆菌LCCC10049、地衣芽孢杆菌LCCC10048和多粘类芽孢杆菌LCCC10023,进行纤维素酶发酵生产的优化比较,分析三种芽孢杆菌产纤维素酶性能及菌株之间互作、拮抗作用。主要采用单菌批次发酵、混合菌株发酵、批次流加补料发酵等方式,依次对培养温度、转速、p H、通气量等参数进行优化,得出以下结论:(1)三种芽孢杆菌所产纤维酶最适酶活条件均为p H 8的磷酸盐缓冲溶液。(2)三种芽孢杆菌涂布于培养皿,在活菌密度4.4×10~5cfu/cm~2条件下,均无抑菌圈形成,表明三者之间无明显拮抗作用。(3)利用枯草芽孢杆菌进行流加补料高密度发酵,其生长代谢及产纤维素酶生产最佳条件为:发酵过程控制葡萄糖浓度2-5 g/L,温度37℃、转速200 rpm、p H 7、通气量1.5 vvm,较高密度发酵,有效活菌数由1.1×1014cfu/m L提高至提高至1.3×1014cfu/m L,纤维素酶活稳定在0.46-0.47 FPU/m L,纤维素酶得率提高了24.8%。(4)利用地衣芽孢杆菌进行流加补料高密度发酵,其生长代谢及产纤维素酶生产最佳条件为:发酵过程控制葡萄糖浓度2-5 g/L,温度37℃、转速200 rpm、p H 7、通气量2.5 vvm,较高密度发酵,有效活菌数由1.0×1014cfu/m L提高至1.3×1014cfu/m L,纤维素酶活稳定在0.46-0.47 FPU/m L,纤维素酶得率提高了31.4%。(5)利用多粘类芽孢杆菌进行流加补料高密度发酵,其生长代谢及产纤维素酶生产最佳条件为:发酵过程控制葡萄糖浓度2-5 g/L,温度30℃、转速150 rpm、p H 6.5、通气量1.5 vvm,较高密度发酵,有效活菌数由6.0×10~8cfu/m L提高至7.0×10~8cfu/m L,纤维素酶活稳定在0.46-0.47 FPU/m L,纤维素酶得率提高了19.7%。(6)利用枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌进行流加补料混菌高密度发酵,混菌生长代谢及纤维素酶生产最佳条件为:控糖浓度2-5 g/L,温度37℃、转速200 rpm、p H 7、通气量1.5 vvm,酶活仍为0.47 FPU/m L,有效活菌数高达2.8×1014cfu/m L,提高了115%。综上所述,本文构建三种芽孢杆菌生产纤维素酶的系统,并探究了枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌混菌发酵的可行性。通过高密度发酵方法,使菌株纤维素酶得率、有效活菌数水平显著提高,本论文研究可为利用芽孢杆菌的工业应用提供了一定的技术支持。
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