【摘 要】
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目的观察左归丸对大鼠去卵巢骨关节炎模型软骨下骨神经肽P物质及其受体（NK1-R）mRNA及蛋白水平的影响,探讨左归丸的药效及作用机制,为左归丸防治绝经后骨关节炎的临床实践提供理论参考和实验依据。方法将60只雌性SPF级SD大鼠随机分为假手术组（10只,0.1mL·kg-1·d-1）与造模组（50只）,摘除后者卵巢,术后常规饲养2周,再将50只大鼠随机分为模型组（0.1mL·kg-1·d-1）、阿仑
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目的观察左归丸对大鼠去卵巢骨关节炎模型软骨下骨神经肽P物质及其受体（NK1-R）mRNA及蛋白水平的影响,探讨左归丸的药效及作用机制,为左归丸防治绝经后骨关节炎的临床实践提供理论参考和实验依据。方法将60只雌性SPF级SD大鼠随机分为假手术组（10只,0.1mL·kg-1·d-1）与造模组（50只）,摘除后者卵巢,术后常规饲养2周,再将50只大鼠随机分为模型组（0.1mL·kg-1·d-1）、阿仑膦酸钠组（63mg·kg-1·d-1）、左归丸低剂量组（2.42g·kg-1·d-1）、左归丸中剂量组（4.84g·kg-1·d-1）、左归丸高剂量组（9.68g·kg-1·d-1）,每组10只。灌胃给药12周后,苏木精-伊红（HE）染色、番红-固绿染色观察大鼠软骨形态学变化;运用显微CT（μ-CT）检测左侧股骨远端软骨下骨局部的骨密度（BMD）;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）水平;免疫荧光法检测大鼠软骨下骨P物质和Runx2蛋白的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠软骨下骨神经肽P物质（SP）及其受体（NK1-R）、OPG、RANKL和Runx2 mRNA表达量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测大鼠软骨下骨SP、NK1-R、OPG和RANK L和蛋白表达量。结果（1）骨形态:HE染色示,与假手术组相比,模型组大鼠软骨表面破坏,结构不清晰,软骨细胞排列紊乱;与模型组相比,阿仑膦酸钠组软骨表面较完好,软骨细胞排列较规则;左归丸低剂量组软骨表面尚完整、平滑,软骨细胞排列尚规则;左归丸中、高剂量组软骨表面较完整、平滑,层次及结构较明晰,软骨细胞排列较规则。番红-固绿染色示,与假手术组相比,模型组软骨表面不完整、毛糙,软骨基质红染区减少;与模型组相比,阿仑膦酸钠组软骨表面尚完整,软骨基质红染区较多,软骨细胞排列较有序;左归丸低剂量组软骨表面完整、平滑,软骨细胞排列规则;左归丸中、高剂量组软骨表面尚完整、平滑,软骨细胞排列尚规则。（2）骨密度:与假手术组相比,模型组大鼠软骨下骨骨密度显著降低（P<0.01）;与模型组相比,各给药组BMD显著上升（P<0.01）。（3）血清炎症因子:与假手术组相比,模型组大鼠血清TNF-α和IL-1β含量显著上升（P<0.01）;与模型组相比,阿仑膦酸钠组、左归丸低、中、高剂量组TNF-α和IL-1β含量显著降低（P<0.01）。（4）免疫荧光:红色荧光表示Runx2表达,绿色荧光表示SP表达。与假手术组相比,模型组软骨下骨Runx2、SP蛋白表达均减少;与模型组相比,阿仑膦酸钠组、左归丸低剂量组软骨下骨Runx2、SP表达均增多,左归丸中剂量组软骨下骨Runx2表达略增多,SP表达略减少,左归丸高剂量组软骨下骨Runx2表达无明显变化,SP表达略增多。（5）mRNA表达:qPCR结果发现,模型组大鼠软骨下骨SP、NK1-R、OPG和Runx2 mRNA表达量显著下降（P<0.01）,同时RANKL mRNA表达量显著升高（P<0.01）。而各给药组SP、NK1-R、OPG和Runx2mRNA表达量除左归丸高剂量组OPG mRNA表达差异无统计学意义外,其余均升高（P<0.05;P<0.01）。（6）蛋白表达:Western blot结果发现,模型组大鼠软骨下骨SP、NK1-R、OPG蛋白表达量显著下降（P<0.01）,同时RANKL蛋白表达量显著上升（P<0.01）。而各给药组SP、NK1-R、OPG蛋白表达量升高（P<0.05;P<0.01）,RANKL蛋白表达量显著降低（P<0.01）。结论（1）女性绝经后因软骨下骨质疏松,引起关节软骨损伤而致骨关节炎。（2）绝经后骨关节炎的形成与软骨下骨中神经肽SP及其受体NK1水平降低有关。（3）左归丸可以通过抑制溶骨作用、促进成骨作用改善或逆转绝经后骨关节炎软骨下骨重建失衡的状态,改善软骨下骨密度,防治绝经后骨关节炎。（4）左归丸可通过抑制血清炎症因子TNF-α、IL-1β表达,减缓关节软骨分解,促进关节软骨修复。（5）阿仑膦酸钠防治绝经后骨关节炎的作用机制可能与神经肽有关。
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