【摘 要】
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第一部分脂多糖动员骨髓CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞及其吞噬氧化修饰低密度脂蛋白形成泡沫细胞
目的研究小鼠骨髓来源的未成熟CD11b+Gr-1+髓系前体细胞在急性炎性脂多糖
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第一部分脂多糖动员骨髓CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞及其吞噬氧化修饰低密度脂蛋白形成泡沫细胞
目的研究小鼠骨髓来源的未成熟CD11b+Gr-1+髓系前体细胞在急性炎性脂多糖(LPS)刺激下动员释放,及其诱导分化成巨噬细胞样细胞后吞噬氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)形成泡沫细胞。
方法小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)(5μg／g体重),24小时后采用流式细胞术分析骨髓,脾脏,和外周血中CD11b-Gr-1+髓系前体细胞,CD11b+Gr-1+单核细胞,和CD11b-Gr-1+粒细胞的百分比的变化。体外泡沫细胞形成实验取小鼠骨髓单个核细胞以DMEM培养基+胎牛血清(FBS)培养,以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导分化48小时,加入100 mg／L氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育48小时以形成脂质负荷泡沫细胞。油红O染色鉴定泡沫细胞。
结果(1)脂多糖(LPS)腹腔注射可以显著促进CD11b+Gr-1+髓系前体细胞从骨髓动员并释放到外周组织；脾脏和循环中CD11b+Gr-1+髓系前体细胞和CD11b+Gr-1-单核细胞显著增加。(2)从骨髓分离的CD11b+Gr-1+髓系前体细胞以粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导分化后形成单核／巨噬细胞样细胞,继而加入氧化修饰低密度脂蛋白(ox-LDL)孵育,可以形成脂质负荷细胞(泡沫细胞)。油红O染色可见泡沫细胞的胞浆中有红染的大型脂滴,核被胞浆内脂滴挤压在一侧。
结论急性炎性刺激脂多糖(LPS)可以动员小鼠骨髓CD11b+Gr-1+髓系前体细胞的向循环和外周组织释放。CD11b+Gr-1+髓系前体细胞可被诱导分化并吞噬氧化修饰低密度脂蛋白形成泡沫细胞。
第二部分高脂饲料动员CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞参与动脉粥样硬化形成的研究
目的研究高脂饲料饲养ApoE-／-小鼠建立动脉粥样硬化动物模型的过程中CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞的变化趋势,以期揭示高脂血症导致动脉粥样硬化的另一种可能的细胞机制。
方法将12只雄性ApoE-／-小鼠随机分为对照组(n=6)和模型组(n=6),分别给予普通饲料与高脂饲料饲喂。8周后酶法和免疫比浊法检测血清甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白A-I(apoA-I)和载脂蛋白B(apoB)水平;HE染色观察主动脉病理形态学改变；油红O染色观察内皮下间隙脂质沉积情况；流式细胞术分析骨髓、脾脏、外周血中CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞的百分比,比较其与对照组之间的差异度。
结果8周的高脂饲料使得ApoE-／-小鼠血脂水平显著改变,动脉粥样硬化斑块明显形成,CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞占骨髓单个核细胞比例显著升高,并进一步被动员释放到外周组织；导致循环中CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞显著增加。结论高脂饲料饲养ApoE-／-小鼠能使CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞的生成显著增加,并向循环和外周组织释放。提示高脂血症可能是通过激活CD11b+Gr-1+髓系抑制性细胞的途径来参与动脉粥样硬化的发生、发展。
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