我国农业农村部194号文件中规定:自2020年7月1日起,饲料生产企业停止生产含有促生长类药物饲料添加剂（中药类除外）的商品饲料。这一规定标志着我国“无抗养殖”时代的开始。干酪乳杆菌作为一种可以代替抗生素应用到畜牧养殖中的益生菌,能够提高动物健康度及生长性能,为优化其高密度发酵工艺与冻干保护剂成分配比,本文通过单因素试验及正交试验在部分类别的材料中进行筛选复配,为工厂批量生产提供参考,具体内容如下:1.高密度发酵工艺的优化。以葡萄糖、乳糖、果糖、蔗糖作为备选碳源;牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、胰蛋白胨作为备选氮源;1:1、1:2、1:3、2:1、3:1作为备选碳氮比;硫酸镁、硫酸铁、硫酸锰、硫酸锌作为备选微量元素,通过单因素选出每组发酵效果前三的材料,结合正交试验进行筛选,确定最优的一组成分。以苹果汁、橙汁、山楂汁、红薯淀粉、西瓜汁为备选生长因子,通过单因素试验选出效果排序前三组成混合液。在发酵过程中补充添加适量碳氮源,乳糖的备选添加量为1.0%～.05%,牛肉膏的备选添加量为.04%～.13%。在发酵过程中调节p H值,其中碳酸钠的添加浓度分别为.15%～.35%;氨水的添加浓度为2%～6%。通过结果对比筛选出最佳的碳氮源以及酸碱调节剂补充量。由试验得到的高密度发酵工艺优化结果为:发酵温度设置恒温37℃、发酵液p H值调至6.5后,以2%的接种量在无氧密闭的环境内进行发酵,在此条件下使用成分为乳糖5g/L、牛肉膏10g/L、硫酸镁0.2g/L、混合生长因子溶液（苹果汁:橙汁:山楂汁=3:2:1）10m l/L的发酵液进行恒温无氧发酵;24h后向发酵液中添加浓度0.3%的乳糖、0.8%的牛肉膏与4%的氨水,继续发酵24h后收获菌种。在此发酵工艺条件下,最终收获的菌种密度可达到2.8×1010CFU/m L。2.冻干保护剂成分配比的优化。以蔗糖、海藻糖、甘油为备选冷冻保护剂;硫代硫酸钠、维生素E、蛋白胨为备选抗氧化剂;甘露醇、乳糖、明胶为备选填充剂;磷酸、氨基酸、山梨醇作为备选酸碱调整剂。通过单因素试验进行筛选,在各组中选出效果最佳的试剂,然后以不同浓度组合进行正交试验,试验中冻干条件为真空度3.08Pa、温度为-80℃。通过试验结果得到的较优配比为海藻糖15%、硫代硫酸钠1%、甘露醇15%、山梨醇3%。通过结果对比发现最优水平组合未包含在正交试验9组方案中,因此后续需要通过响应面进行最优水平确定。3.冻干保护剂各成分交互作用分析及最佳水平的确定。通过响应面软件Design-Expert 13.0进行响应面分析,对冻干保护剂正交试验最佳水平进行确定,并通过曲面图对冻干保护剂各个成分之间的交互作用进行分析。通过试验结果得到的冻干保护剂优化结果为:海藻糖15%、甘露醇15%、山梨醇3%、硫代硫酸钠2%,在此条件下进行测试测得菌种存活率为90%。冷藏储存四周后后检测菌种存活率为88%。