【摘 要】
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本研究探讨了猪卵母细胞体外成熟、孤雌胚体外培养部分和猪卵母细胞种内及种间显微受精一些相关问题。猪卵母细胞体外成熟部分中探讨了(1)成熟液中促性腺激素的添加方式对猪
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本研究探讨了猪卵母细胞体外成熟、孤雌胚体外培养部分和猪卵母细胞种内及种间显微受精一些相关问题。猪卵母细胞体外成熟部分中探讨了(1)成熟液中促性腺激素的添加方式对猪卵母细胞孤雌激活早期发育影响;(2)体外成熟中不同浓度的半胱氨酸和EGF对猪卵母细胞孤雌激活后早期发育的影响。猪孤雌胚体外培养部分研究了胚胎培养液体积对猪早期孤雌激活胚发育的影响。猪胞浆内显微受精部分包括了(1)不同的激活方法对猪ICSI卵原核形成的影响;(2)不同激活方法对猪ICSI卵早期发育效果的影响;(3)猪精子、食蟹猴精子及水牛精子分别注入猪卵母细胞的原核形成比较;(4)猪精子、食蟹猴精子及水牛精子分别注入猪卵母细胞后ICSI胚发育潜力的比较。试验结果:猪卵母细胞体外成熟部分中(1)促性腺激素的添加方式采用FSH+LH 22h、换液、在含FSH+LH再培养22h;(2)体外成熟液中添加1.2 mmol/L半胱氨酸;(3)体外成熟液中添加10 ng/mL EGF,对猪卵母细胞孤雌激活后早期发育效果较好。猪孤雌胚体外培养部分中化学激活后胚胎培养按平均每个胚胎2-3μL培养液培养,孤雌胚发育效果较好。猪卵母细胞胞浆内显微受精部分中(1)Ion(5min)+6-DMAP(4h)与Ion(5min)+NCSU23(3h)+6-DMAP(4h)所得结果在原核形成率和囊胚形成率上没有显著差异,都可用于猪ICSI卵的人工激活;(2)水牛精子、食蟹猴精子分别注入到猪卵母细胞内,观察到了雌雄原核和精子解聚。(3)水牛精子、食蟹猴精子分别注入到猪卵母细胞,经体外培养发育到了囊胚。
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