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背景和目的：最新研究发现肺炎支原体(Mycoplasma penumoniae, MP)毒力因子--社区获得性呼吸窘迫综合征毒素(Community-acquired respiratory distress syndrome toxin, CARDS TX)参与MP侵犯呼吸道等病理生理过程。CARDS TX是由MP基因MPN372编码表达的68KDa蛋白质,主要分布于MP胞膜表面和胞质,具有二磷酸腺苷核糖转移酶(ADP-ribosyltransferase, ART)活性,能造成宿主细胞空泡化,最终导致细胞死亡,参与了MP肺炎等疾病过程。因而被认为是MP的一个重要毒力因子,对其的深入研究可能为MP感染的发病机制提供了一个新的研究方向。本研究拟在体外重组表达并纯化具有活性的CARDS TX,并制备其兔多克隆抗体。为了更好的阐明CARDS TX的特性以及其在MP感染发病机制中的作用,我们进一步研究了CARDS TX在人肺腺癌A549细胞中的定位,对DNA损伤的影响及对人视网膜色素上皮RPE细胞纤毛长度的影响。方法：1.构建带有His-tag的表达载体Pet28b (+)-CARDS,经Ni柱纯化得到单一重组的CARDS TX (rCARDS TX).2.倒置显微镜观察细胞形态学及MTT检测细胞存活率。3.免疫荧光法检测MP或rCARDS TX处理A549细胞后CARDS TX在细胞的分布,及其与MP粘附的关系。4.免疫荧光法检测γH2AX。5.免疫荧光法检测人视网膜色素上皮RPE细胞纤毛的长度。结果：1.采用BamHI和Xhol限制性内切酶双酶切鉴定质粒PET-28b(+)-CARDS,凝胶电泳可见CARDS TX基因片段大小为1773bp。通过考马斯亮蓝染色,纯化的rCARDS TX蛋白清晰可见。2. rCARDS TX处理的细胞生长明显受到抑制,且部分细胞出现了空泡化,50μg/ml处理组细胞空泡化严重并导致细胞死亡,细胞数目减少。MTT试验显示rCARDS TX处理的A549细胞存活率明显下降。3.免疫荧光显示CARDS TX在A549细胞的细胞质和细胞核均有分布,胰酶处理MP后,CARDS TX在细胞内的分布减少。4. rCARDS TX处理A549细胞后细胞核内形成γH2AX焦点。5.MP或rCARDS TX处理RPE细胞后,纤毛长度明显下降。结论：1.成功的构建Pet28(+)-CARDS表达载体,并纯化出具有活性的rCARDS TX.2.在MP或rCARDS TX处理的A549细胞中,CARDS TX在细胞的细胞质和细胞核均有分布,并且与MP的黏附力有关,当MP黏附力下降时,CARDS TX在细胞内的分布减少。3.rCARDS TX和MP均可引起细胞DNA的损伤。4.MP和rCARDS TX均可导致RPE细胞纤毛长度变短。