植物病害问题严重影响着农业自然资源的利用,目前人们主要是采用化学农药进行植物病原菌的防治,但是化学农药的滥用会造成环境污染,导致病原菌对化学农药产生抗药性,对人类和动物健康等方面造成危害。而生物防治可以有效解决上述问题。深绿木霉（Trichoderma atroviride）是一种重要的生物防治菌,可以抑制多种植物病原菌,然而目前对深绿木霉发挥其生防功能的分子机制尚不完全清楚。CDK5属于细胞周期蛋白依赖性激酶家族,在木霉菌生物防治过程中起着非常重要的作用,然而目前对木霉cdk5基因功能的研究却鲜有报道。CRISPR/Cas9被发现作为一种新型的基因编辑技术,具有操作简便、成本低廉、高效快捷等优越性。但在真菌中,由于真菌的低同源重组率,以及缺乏高效的遗传转化体系、启动子和有效筛选标记等原因,限制了其在真菌中的应用。本研究的主要内容是采用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建了深绿木霉基因敲除体系,并对深绿木霉cdk5基因进行了敲除。本文采用生物信息学分析方法分析表明CDK5在木霉中广泛存在且高度保守;采用CRISPR/Cas9基因编辑方法,在深绿木霉中构建了敲除体系,对cdk5进行敲除未能获得正确的转化子,由此推测深绿木霉cdk5基因对细胞的正常生长十分重要,对其进行敲除可能存在一定的致死性,或者导致生长极其缓慢从而难以筛选;为排除构建的敲除体系的无效而导致阴性结果的可能性,进行了构建的敲除体系有效性试验,靶向ura5基因,采用体外装配的Cas9/g RNA复合物和深绿木霉5S r RNA:sg RNA两种策略,成功实现了ura5的定点突变,并获得了较高的敲除效率。本文在深绿木霉中应用CRISPR/Cas9系统进行了基因敲除实践,为后续cdk5基因功能的研究排除了障碍,并为深绿木霉功能基因的筛选与验证以及工程菌株的构建等提供了理论基础。