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内皮源性微体(endothelial microparticles,EMPs)是由活化或凋亡的内皮细胞(endothelial cells,ECs)产生,直径介于0.1μm到1μm之间的小颗粒。近年来,EMPs在细胞间生物信息传递以及心血管疾病发病过程中的作用逐渐引起重视。已有研究表明,在动脉粥样硬化和高血压等心血管疾病发病过程中,ECs表面蛋白如细胞间黏附分子-1(intercellular cell adhesion molecule-1,ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(vascular cell adhesion molecule-1,VCAM-1)等表达上调,使得 ECs能够招募血液中的细胞尤其是白细胞,从而参与血管重建。然而,高血压状态下在异常增高的动脉周期性张应变(cyclic strain)的作用下,以及血管炎症状态下在肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor,TNF-α)刺激下,ECs所产生的EMPs是否也同样高表达ECs表面蛋白,是否能作为信息载体调控ECs增殖尚不清楚。 本实验对体外模拟高血压状态(高周期性张应变)和TNF-α刺激这两种条件下ECs产生的EMPs进行研究,探讨了高张应变条件下产生的EMPs对ECs增殖的影响。采用Flexercell细胞张应变加载系统对大鼠胸主动脉ECs分别施加5%(正常生理状态)和18%(模拟高血压状态)幅度的周期性张应变,加载频率均为1.25 Hz,加载持续时间为24 h,然后收集上清液,进行超速离心,弃上清,提取得到EMPs;用亲脂性苯乙烯基(lipophilic styryl)以及电镜对离心得到的EMPs进行形态鉴定;用流式细胞术对不同加载幅度的张应变加载以及 TNF-α刺激产生的EMPs进行 AnnexinV阳性计数与EMPs表面ICAM-1表达量测定;荧光定量PCR(RT-PCR)检测不同张应变条件下ECs的TNF-αmRNA表达变化;对收集到的不同张应变条件下产生的EMPs与正常ECs进行共培养,BrdU-ELISA法检测不同张应变作用下产生的EMPs对ECs增殖的影响。 实验结果显示,18%高张应变组ECs所产生AnnexinV阳性EMPs的数量明显高于5%正常张应变组(p<0.05);与5%正常张应变组相比,18%高张应变组EMPs表面ICAM-1分子的表达量显著上升(p<0.05);同样,与对照组相比,TNF-α刺激条件下 ECs所产生AnnexinV阳性EMPs的数量与EMPs表面ICAM-1的表达也显著上升(p<0.05);与5%正常张应变组相比,18%的高张应变条件下ECs的TNF-αmRNA表达量显著上升(p<0.05);与5%正常张应变组相比,18%高张应条件下产生的EMPs刺激ECs后OD450吸光度显著上升(p<0.05)。结果表明,高张应变和TNF-α刺激条件下ECs所产生的EMPs数量增加,且都携带了细胞表面分子ICAM-1;高张应变条件下ECs产生的EMPs具有较强的促进ECs增殖的作用。 本研究发现了高周期性张应变与 TNF-α刺激条件下 ECs产生EMPs数量以及表面ICAM-1表达增加的变化趋势,明确了高张应变条件下EMPs的促细胞增殖功能。高张应变作用下ECs内TNF-α表达上调,提示高张应变与TNF-α这两种不同类型刺激间存在一定的关系,ECs的TNF-α高表达可能介导了EMPs表面ICAM-1分子高表达。这些结果为后续 EMPs在力学因素诱导血管重建中的作用及其力学生物学机制研究提供了新的实验证据。