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本研究以转豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(Cowpea Trypsin Inhibitor,CpTI)苹果(Mahts domestica Borkh)组培苗和相对敏感品系的棉蛉虫(Helicoverpa armigera)为试材,采用叶片蛋白质的等电聚焦电泳和毛细管区带电泳分析,研究了外源基因在植株体内蛋白质水平上的表达;同时以饲喂幼虫的方式,分析幼虫的较正死亡率和虫体内的类胰凝乳蛋白酶活力的变化,初步筛选出具有抗虫特性的苹果株系。转基因苹果品种为嘎拉、王林、乔纳金、富士,为经根癌农杆菌介导的叶圆片转化法转化高效启动子启动的CpTI基因转化株系。其中嘎拉品种选用46个株系,编号为1～46;王林9个株系编号为47～55;乔纳金3个株系编号为56～58;富士2个株系编号为59,60。主要实验结果如下: 1.较为优化的适宜苹果叶片蛋白质的等电聚焦电泳程序为:采用改良丙酮沉淀法提取苹果叶片蛋白质;电泳过程中聚丙烯酰胺凝胶浓度为3.66%,两性电解质范围为3.5～9.0,浓度为2%每管加样蛋白质量为33.8μg;电泳:恒压100V,10min;恒压500V,10min;恒压750V,3h 30min;电泳后考马斯亮蓝R-250染色,先固定再染色。 2.等电聚焦结果显示:嘎拉株系中2,8,11,12,14,19,27,31,32,33,34,36共12个株系在pH值6.18～6.30之间发现有一特异条带;王林品种4个株系的电泳结果与对照有差异,分别为47,50,51,55在pH值6.18～6.30之间有一特异条带;富士59在pH值6.18～6.30之间发现有一特异条带;乔纳金品种中没有发现有特异条带出现。 3.较为优化的适宜苹果叶片蛋白质的毛细管电泳程序:采用改良丙酮沉淀法提取蛋白质,电泳过程中温度为25℃,电压为20kV,0.5psi进样5s,电泳时间为17min,检测波长在280nm处的蛋白质区带。电泳结果表明:与对照相比嘎拉株系12,19,32,39在第7.65分钟分别出现一条特异峰带。 4.虫试结果显示部分转CpTI基因苹果株系有较强的杀虫和抑虫作用,株系最高虫试死亡率是100%,为株系32,51。其中较正死亡率为正值的株系共28个,分别为:2,4,8,9,10,11,12,13,16,17,19,21,24,27,31,32,33,34,36,39,43,47,50,51,55,56,58和59,其中株系2,12,27,31,32,34,39,50,51,56较正死亡率大于等于50%,表明这些株系有明显的杀虫和抑虫效果,并且经秩合检验分析,喂食27,31,32和51的虫重与对照虫重相比差异显著,表明株系27,31,32,51有明显抑制幼虫生长发育的作用。 5.喂食转CpTI基因苹果组培苗的棉蛉虫体内类胰凝乳蛋白酶活性变化的测定实验表明:部分转基因株系有明显的抑制虫体内类胰凝乳蛋白酶活性的作用,但部分株系抑制能力较弱甚至没有抑制能力。以转基因苗株系喂食棉虫幼虫,共9个株系使