肺癌是一种复杂多样的疾病,为全球癌症相关死亡的最常见原因。肺癌患者的五年生存率低,预后差,现有的诊疗方法并没有满足治疗需求,总体疗效较低,所以实现肺癌的早期诊断是取得较好治疗效果的关键。核酸适配体是能够特异性且高亲和力结合靶分子的单链DNA或RNA分子,已有研究表明,核酸适配体在癌症的诊断及治疗中具有良好的应用前景。因此,我们采用细胞SELEX技术筛选肺腺癌细胞H-1975的核酸适配体,并对筛选得到的核酸适配体进行了特异性和亲和性鉴定,为肺癌特异标志物的发现,建立基于核酸适配体的肺癌早期诊断和治疗技术鉴定了基础。本论文的主要研究内容与结果包括:(1)肺腺癌细胞H-1975核酸适配体的筛选以人工合成的随机ss DNA寡核苷酸文库(包含24个碱基的前后引物区,以及52个碱基的随机序列区)为初始库,以肺腺癌细胞H-1975为靶细胞,人肺泡上皮细胞HPAEpi C为阴性对照细胞,通过优化筛选条件,经18轮的筛选,得到4条特异性识别肺腺癌细胞H-1975的核酸适配体,分别命名为T1、T2、T3和T4。(2)肺腺癌细胞H-1975核酸适配体的二级结构预测利用NUPACK软件预测分析了T1、T2、T3、T4的二级结构。结果表明,T1、T2、T3、T4具有丰富的二级结构,主要呈茎环结构、茎凸环结构。(3)核酸适配体结合肺腺癌细胞H-1975的亲和力与特异性鉴定采用流式细胞术鉴定了4条高丰度适配体(T1、T2、T3、T4)与肺腺癌细胞H-1975的亲和力。结果表明,4条核酸适配体的Kd值分别为92.3±7.6n M,108.6±16.2n M,66.25±12.6n M,36.3±5.8n M,均在纳摩尔范围之内,说明这4条适配体与肺腺癌细胞H-1975之间具有较高的结合力。选择丰度最高的核酸适配体T4,采用流式细胞术鉴定了核酸适配体T4与肺腺癌细胞H-1975的特异性。结果表明,相比初始库,核酸适配体T4与肺腺癌细胞H-1975结合后的荧光信号明显增强,而与其他几种细胞结合后的荧光信号几乎没有变化。说明核酸适配体T4能够特异性地结合肺腺癌细胞H-1975,而不与对照细胞以及其他人类肿瘤细胞或正常细胞结合,有望成为肺腺癌细胞H-1975特异性地分子探针。(4)胰蛋白酶处理对核酸适配体与肺腺癌细胞H-1975结合力的影响选择丰度最高的核酸适配体T4,采用流式细胞术研究了胰蛋白酶处理下核酸适配体T4与肺腺癌细胞H-1975的结合能力。结果表明,随着胰蛋白酶处理时间的增多,核酸适配体T4与肺腺癌细胞H-1975结合后的荧光信号逐渐减弱,当处理5min后,荧光曲线几乎与初始库的重合,说明核酸适配体T4可与肺腺癌细胞H-1975表面的某一种蛋白质结合,这为发现肺癌的未知肿瘤标记物提供了新思路。