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近年来,中国逐渐进入老龄化社会,而癌症的发病率也在逐步上升。全国目前每年都会增加几百万癌症病人。其中我国的食管癌是全球发病率和死亡率最高的国家,病理亚型主要以食管鳞癌为主。东亚地区大约一半以上的食管鳞癌都发生在中国。但是目前对于食管鳞癌的诊断治疗手段比较局限,目前仍然以手术和放化疗为主,治疗效果并不理想。并且食管鳞癌的早期症状不明显,患者往往在就诊时已经处于中晚期。目前患者总体5年生存率较低,所以寻找食管鳞癌的早期诊断方法对于优化食管鳞癌的治疗和诊断都有非同寻常的意义。MicroRNAs(miRNAs)属于是在实现转录完成的情况下,对基因实现的表达作用效果进行有效调控处理的非编码性质的小RNA,通过结合到靶mRNAs的编码区或者3’-UTR中,使mRNAs降解或抑制其转录,调节基因表达。近年来随着分子生物学的进步,人们发现更多的miRNAs在癌症的发生等进程中扮演着必不可少角色。而在本研究中,我们根据已有的研究报告选定了 2种miRNAs(miR-373-3p和miR-193b-3p)作为本次的研究对象,其中,miR-373-3p在多种肿瘤中表达上调,被视为癌基因在肿瘤中发挥作用;而miR-193b-3p正好相反,其在肿瘤表达下调,经常被人视作抑癌基因。我们在食管鳞癌中研究两种表达情况和作用方向不同miRNA,希望能够更加全面地解释miRNA在食管鳞癌中的作用机制。在本次实验我们利用RT-qPCR法分析了 2种miRNAs在食管鳞癌患者血清和组织中的表达情况、相关基因的表达以及利用MSP法测试了相关基因呈现出来的甲基化表现,由此初步明确这两类miRNAs能够于食管鳞癌期间呈现出来的表达效果以及相关的调控实现机制,所得实验信息是:1、利用RT-qPCR方法检测了 miR-373-3p和miR-193b-3p的表达水平发现miR-373-3p在食管鳞癌中高表达(p<0.01),miR-193b-3 p在食管鳞癌中低表达(p<0.01)。并且2种miRNAs的AUC值分别为0.883(95%CI:0.776-0.989;灵敏度为80%;特异性为 90%)、0.815(95%CI:0.679-0.937;灵敏度为 81.7%;特异性为 73.7%)。同时我们发现2种血清miRNAs在手术前和手术后的表达情况具有显著差异,血清miR-373-3p术前高表达,术后低表达;而血清miR-193b-3p术前低表达,术后高表达,且均具有极显著差异(p<0.01)。对这两种miRNAs在食管鳞癌患者癌组织和癌旁组织中的表达情况分析,miR-373-3p在癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织,miR-193b-3p在癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织,与之前在血清中的实验趋势相同。因此,血清中的miRNAs可能来自于食管鳞癌癌组织。我们选定的这两种miRNAs可能能够用于食管鳞癌的早期检测和治疗等方面。2、miR-373-3p的调控机制。根据生物信息学预测结果以及查阅相关文献,我们选取了与miR-373-3p有关的两个通路Hippo信号通路和p53信号通路;并对其中NF2、LATS2、TAZ、JNK、CASP9基因的mRNA的表达水平进行分析,发现6种基因在食管鳞癌中的表达水平与miR-373-3p的表达水平呈现负相关关系,miR-373-3p与靶基因OXR1和LATS2的相关系数分别为r=-0.699、-0.704,且具有统计学意义(p<0.05),结果初步表明高表达的miR-373-3p可以抑制OXR1和LATS2的表达,进而影响Hippo和p53信号通路及其相关基因的表达,参与食管鳞癌的发展。3、miR-193b-3p的调控机制。同样的,我们也选取了 miR-193b-3p的两个靶基因及其上下游基因,并对RB、CCND1、p16、IGF1、IGF1 R、PI3K这6个基因进行表达水平的分析。结果发现CCND1、IGF1、IGF1R、PI3K在癌组织中高表达,RB和p16在癌组织中低表达;且miR-193b-3p与基因CCND1的相关系数是r=-0.645,且具有统计学意义(p<0.05),表明低表达的miR-193b-3p可以促进CCND1的表达,进而影响相关通路以及基因的表达水平参与到食管鳞癌的发生等方面。4、为了探究miR-373-3p和miR-193b-3p基因启动子区甲基化程度与其表达水平的关系,本实验检测了食管鳞癌患者中miR-373-3p和miR-193b-3p的基因启动子区甲基化程度,发现miR-193b-3p基因启动子区倾向于高甲基化,miR-373-3p基因启动子区低甲基化;miR-373-3p启动子区低甲基化的患者miR-373-3p的表达水平高,但是miR-193b-3p所在区域的病人其miR-193b-3p呈现出来的表达能力较弱,由此明确miRNAs所在启动子区域实现的甲基化水平与miRNAs的表达水平可能是负相关关系。结合上述实验结果,本研究综合分析了 miR-373-3p和miR-193b-3p在食管鳞癌中的可能作用机理,即通过两者的基因启动子区域的甲基化表观遗传学修饰,导致miR-373-3p的高表达和miR-193b-3p的低表达,从而对其靶基因进行调控,使食管鳞癌中的促癌因子增加,抑癌因子下调,进而影响整个通路系统,导致肿瘤的发生发展。