黄曲霉毒素G1与游离DNA相互作用机理及其影响因素研究

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本文采用不同的分析方法,研究了黄曲霉毒素G1(AFG1)与鲱鱼精子脱氧核糖核酸(DNA)的体外结合特性,并确定其结合模式。运用共振光散射法测定黄曲霉毒素G1与游离DNA相互作用的结合强度,计算其结合饱和值,并针对外部因素对黄曲霉毒素G1与游离DNA相互作用的影响进行了分析。通过光谱学以及光谱分析的方法研究了黄曲霉毒素G1与鲱鱼精子DNA的体外结合模式。紫外可见光谱结果分析表明,黄曲霉毒素G1与DNA相互作用形成的复合物在一定程度上改变了DNA的双螺旋结构,其现象与黄曲霉毒素G1可能是以嵌入的形式结合进入DNA双螺旋密切相关。DNA熔点温度的测定结果推测,黄曲霉毒素G1分子可能通过嵌插作用进入DNA分子内部,使DNA双螺旋结构更加稳定、紧密,最终使DNA的熔点Tm增加了12.8℃。圆二色谱(CD)的实验结果推测表明,黄曲霉毒素G1分子可以通过嵌入的方式与DNA结合,黄曲霉毒素G1分子的嵌入破坏了DNA碱基间的相互作用,改变了碱基之间的作用力,导致275 nm附近CD信号强度增加,而245 nm处CD信号强度降低,使DNA分子的二级结构发生变化。琼脂糖凝胶电泳实验表明黄曲霉毒素G1可以随着DNA向正电极方向迁移,并且在紫外灯的照射下发出绿色荧光,进一步推断了黄曲霉毒素G1可能是通过嵌入结合进入到DNA的碱基对之间,与游离DNA在体外以嵌插结合的方式相互作用。荧光光谱研究表明,黄曲霉毒素G1与DNA形成了一种新的AFG1-DNA复合物,该体系相互作用方式可能为嵌插作用。综合以上实验结果可以判断黄曲霉毒素G1与游离DNA相互作用的结合模式为嵌入结合。根据紫外可见光光谱分析黄曲霉毒素G1与DNA之间的相互作用强度,得到黄曲霉毒素G1与DNA的结合常数为6.80×101 L/mol,符合经典的嵌入结合。荧光猝灭光谱表明黄曲霉毒素G1和DNA相互作用的猝灭过程可能是由动态猝灭主导与静态猝灭共存的过程。通过荧光双对数回归曲线方程结果分析,黄曲霉毒素G1与DNA的结合常数为0.12 L/mol,其结合常数较弱。热力学数据表明黄曲霉毒素G1与DNA的嵌入结合反应是一个自发的反应,其结合反应的主要驱动力是氢键和范德华力。而共振光散射光谱(RLS)实验结果表明,黄曲霉毒素G1通过嵌入结合进入DNA增大了粒子的体积,并产生了更强的RLS信号。同时通过共振散射光谱数据计算得出黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素B1和溴化乙锭的DNA结合饱和值(DNA BSV)分别为1.62、2.14和15.59,说明黄曲霉毒素G1与DNA的结合能力比黄曲霉毒素B1和溴化乙锭与DNA的结合能力较弱。通过共振散射光谱法研究分析外部因素对黄曲霉毒素G1与游离DNA相互作用的影响。探究了黄曲霉毒素G1与DNA相互作用的最适条件为:p H7.40、30℃、较低钠离子强度。由于p H值过高或过低都不利于黄曲霉毒素G1与DNA的相互作用,AFG1-DNA体系的共振散射信号强度对温度及阳离子较为敏感。另外,加入的一些环境共存物如葡萄糖、L-赖氨酸、烟酸,虽然会使得AFG1-DNA体系的共振散射信号增强,但DNA的结合饱和值会受到影响而降低。而维生素C的加入会促进黄曲霉毒素G1与DNA的嵌入作用,使该体系的共振散射信号增强。尿素、甘油的存在对AFG1-DNA体系的影响比较大,造成其共振散射信号不稳定,无法准确计算AFG1-DNA体系的DNA结合饱和值。这些研究结果将有助于更好地了解黄曲霉毒素G1与游离DNA相互作用的最佳条件,为今后建立基于与DNA嵌入结合的黄曲霉毒素的消除方法提供参考。为DNA磁珠吸附或透析等方法选择性结合黄曲霉毒素从而达到消除目的提供了参考依据。
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