【摘 要】
：
禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）是引起小麦赤霉病（Fusarium head blight,FHB）的一种主要致病菌,小麦赤霉病每年给我国造成巨大经济损失。禾谷镰刀菌在侵染植物过程中会产生多种毒素,不仅造成小麦产量损失,还严重降低小麦品质,影响食品安全。由于植物中缺乏天然的抗赤霉病种质资源,所以从禾谷镰刀菌关键致病基因中筛选具有抗赤霉病功能的RNA干扰片段,对于通过转基因技术
【基金项目】
：
国家自然科学基金； 农业部转基因专项（2104ZX0800202B-001;2016ZX08002001-003）；
论文部分内容阅读
禾谷镰刀菌（Fusarium graminearum）是引起小麦赤霉病（Fusarium head blight,FHB）的一种主要致病菌,小麦赤霉病每年给我国造成巨大经济损失。禾谷镰刀菌在侵染植物过程中会产生多种毒素,不仅造成小麦产量损失,还严重降低小麦品质,影响食品安全。由于植物中缺乏天然的抗赤霉病种质资源,所以从禾谷镰刀菌关键致病基因中筛选具有抗赤霉病功能的RNA干扰片段,对于通过转基因技术培育抗赤霉病的小麦新品种,具有重要意义。本研究在构建表达载体的基础上,筛选了禾谷镰刀菌致病相关基因的RNA干扰片段,主要研究内容如下:1.表达载体的构建。（1）双启动子、双终止子真菌表达载体构建。在单启动子、单终止子真菌表达载体（psxsh）的基础上,增加一个启动子和一个终止子,构建了双启动子真菌表达载体（psxsh-DP-DT）。然后将细胞色素P450羊毛固醇C-14α去甲基化酶（cytochrome P450 lanosterol C-14α-demethylase,CYP51）基因、葡聚糖合酶（glucan sythesis,GLS）基因以及其他麦角固醇合成相关基因RNAi片段11个,构建到双启动子真菌表达载体（psxsh-DP-DT）上,共构建载体11个。（2）双启动子、双终止子植物表达载体构建。将35Sn与Cmps、Ubi、Lem1、Lem2五个启动子的不同组合,包括35Sn-cmps、35Sn-Lem2、35Sn-Lem1、35Sn-ubi、35Sn-35Sn,分别构建到可用于小麦的农杆菌（pTR）和基因枪（pXJC）表达载体上,共构建载体10个。（3）将禾谷镰刀菌PKC-5和Chs3b-5序列,分别构建单茎环结构的RNAi构建体,然后经t RNA串联在一起,再构建到双启动子基因枪小麦表达载体（pXJC）上,共构建载体5个。2.禾谷镰刀菌致病基因RNA干扰片段功能分析。（1）CYP51、GLS基因茎环结构和双链结构RNAi构建体在禾谷镰刀菌中干扰效率的比较。转化所用基因有两种构建形式:A,基因单茎环片段构建到单启单终真菌表达载体（psxsh）上,获得psxsh-Cyp51-AS751和psxsh-gls-AS6;B,基因双链片段构建到双启双终真菌表达载体（psxsh-DP-DT）上,获得psxsh-DP-DT-Cyp51-S751和psxsh-DP-DT-gls-S6。将以上真菌表达载体转化到野生型禾谷镰刀菌5035中,在新霉素抗性培养基上进行筛选,通过PCR鉴定获得:茎环形式构建所得阳性转化子Cyp51-AS751和gls-AS6以及双链形式构建所得阳性转化子Cyp51-S751和gls-S6。表型实验结果表明:相较于野生型5035而言,转化子Cyp51-S751生长速度缓慢、菌丝形态异常且不向四周扩展,而转化子Cyp51-AS751没有明显的表型变化;转化子gls-AS6菌丝致密不扩展,生长缓慢,而gls-S6没有明显表型变化。（2）禾谷镰刀菌致病基因RNA干扰片段原生质体转化及表型分析。转化所用基因片段有F10-1、F10-2、F10-3、F02-1、F02-2、F04、F06、Cyp51-748、Cyp51-788、myo II-chs3b-chs7-gls-myo I。将以上基因双链片段构建到双启双终真菌表达载体（psxsh-DP-DT）上,进行禾谷镰刀菌原生质体转化。表型鉴定结果显示,转化子F02-2和Cyp51-788与野生型禾谷镰刀菌5035相比较,有明显表型变化,不仅生长速度缓慢,而且菌丝稀疏不扩展。3.分离最小表达框DNA片段cmps-8mR7、35SN-8mR7和ubi-PMI,转化扬麦158,筛选获得1株T0代阳性植株。通过温室加代鉴定,目前处于T1代。4.将课题组已获得的以襄麦76为受体所获得的转基因小麦材料加代繁殖,以PCR鉴定它们所含的转基因Chs3b和GLS,目前处于T3代,鉴定结果表明R16a1和R16a2株系的Dubi35s-chs3b As5As1全部丢失。
其他文献
糖尿病（Diabetes Mellitus,DM）是伴侣动物中常见的代谢性内分泌疾病之一,多发生在中、老龄犬中。其发生的原因与肥胖、免疫、药物、胰腺炎和环境因素相关,典型的临床症状包括多饮、多食、多尿和体重降低等。目前的治疗手段包括注射胰岛素或将干细胞诱导成为胰岛素分泌型细胞以恢复胰岛功能,但这些方法仍存在成本高昂或难以规模化制备的问题,故而在宠物临床糖尿病治疗中,迫切需要一种价格低廉且方便有效的
近年来,国内奶牛养殖业迅速发展,规模化养殖水平提高,但是奶牛子宫内膜炎对我国奶牛业造成的经济损失仍居高不下。陕西省近10年未见规模化奶牛场子宫内膜炎病因的报道,同时本实验室研究发现陕西牛场奶牛子宫内膜炎病料中化脓隐秘杆菌分离率较高。为此,本试验调查分析了陕西渭南市某规模化牛场子宫内膜炎的病因,分离鉴定了子宫内膜炎病料中的化脓隐秘杆菌,并进行了致病性试验,取得以下结果:1.对陕西渭南市某规模化牛场子
布鲁氏菌病（Brucellosis）简称“布病”,是革兰阴性、兼性胞内寄生菌布鲁氏菌（Brucella）引起的一种人兽共患传染病,广泛流行于世界各地,严重威胁人类健康,给畜牧业生产造成了巨大损失。布鲁氏菌可感染人、牛、羊、猪、鹿、犬及多种野生动物,人类通常通过接触受感染动物及其分泌物,或进食受污染的肉类或奶制品而遭感染。2016年,农业部、国家卫生计生委发布《国家布鲁氏菌病防治计划（2016—20
肥胖是导致二型糖尿病,心血管疾病及癌症等疾病发生,并危害人类健康的重要因素。线粒体是细胞内的能量工厂,参与细胞的各种生物过程。研究显示肥胖个体的线粒体数目和功能都发生了异常。Adipose（Adp）是一种进化上保守及广谱表达的抗肥胖基因,但目前对其功能及调控机理尚不清楚。已有研究表明Adp能够抑制脂肪分化和促进成肌分化,同时还能增加胰岛素的敏感性和减少脂滴的积累。这些表明Adp与糖脂代谢及能量调节
本课题以西藏昌都地区阿旺绵羊为对象,探究阿旺绵羊的超数排卵及胚胎冷冻保存技术,旨在阿旺绵羊上集成示范胚胎移植、胚胎冷冻等技术的推广应用,以利于对其进行保种、扩繁及良种推广。本试验利用不同产地激素药物,采用不同剂量,在不同月份对阿旺绵羊进行了超数排卵处理,并应用两种不同方法进行了胚胎冷冻与解冻移植,得出以下试验结论:1.采用国产（宁波）高剂量FSH、比利时产FSH及两种FSH接续超排阿旺绵羊,其均黄
林麝是一种濒危动物,是我国规定的一级保护野生动物,从成熟雄性林麝香囊腺中提取的麝香是一种名贵的中药材。传统上对麝香的获取都是通过捕获野生林麝,然后进行采集,这个过程往往会对野生林麝造成巨大伤害,引起很大伤亡。本着既保护又利用的原则,我国批准在林麝天然的繁殖地可对其进行人工养殖。陕西凤县是野生林麝在秦岭繁衍生息的主要区域,在国家政策的引导下于1986年开始林麝的人工养殖,目前已成为国内规模最大的人工
陕西省是我国主要的奶山羊养殖的省份之一,富平县作为陕西省奶山羊产业发展的领头羊,占到全省奶山羊存栏和羊乳产量的30%。乳房炎是奶山羊养殖中最为常见的疾病之一。近年来随着陕西奶山羊养殖业的迅速发展,乳房炎问题同样也日益突出,特别是在管理措施不到位的散养户以及小规模养殖户。乳房炎的发生不仅造成动物泌乳量减少,乳品质量降低,且有害细菌浓度超标,甚至造成哺乳动物死亡。奶山羊乳房炎不仅给奶山羊养殖造成严重损
根属于植物的营养器官,担负着吸收养分、水分及固定植株等功能。其生长发育与植物生长物质的调控息息相关,且调控过程伴有多种植物激素的参与。腐胺（putrescine,Put）作为一种小分子生物活性物质,广泛存在于生物体内,参与植物衰老进程的调控、体细胞胚胎发生、花芽分化、花和果实的发育以及各种生理胁迫反应等,被誉为一种新型的植物激素。而目前关于腐胺与植物激素间的互作对拟南芥主根发育的分子机制研究鲜有报
水稻是我国乃至世界上最为重要的农作物之一,病害是影响其产量和品质的关键因素。其中,病毒性病害呈现逐年加重的趋势。本研究将探究黑条矮缩病毒（水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒）基因组编码蛋白质对水稻正常生理活动的影响以及水稻与RBSDV P8蛋白互作中相关基因的功能。水稻黑条矮缩病毒（Rice black streaked dwarf virus,RBSDV）的基因组由10条双链RNA构成,其基