禾谷镰刀菌FgCHS8基因功能研究

来源 :四川农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhangtingzhi2009
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赤霉病降低产量劣化品质,是小麦的主要病害之一。禾谷镰刀菌是引起赤霉病的主要致病菌。科学认识禾谷镰刀菌的致病机理,对高效防治赤霉病非常重要。几丁质是丝状真菌细胞壁的重要组成成分,在生长和生殖中起重要作用。几丁质合成酶是几丁质生物合成途径重要限速酶。水杨酸(SA)是一种重要的植物抗性激素,与小麦赤霉病抗性密切相关。本文对一个受SA抑制的几丁质合成酶基因(CHS)FGSG06550进行功能分析,取得以下主要结果:1、从Ensemb1 Fungi数据库中获取FGSG06550基因序列和蛋白序列;对分属于18种真菌的89个几丁质合成酶基因进行系统进化树分析和结构域分析,发现几丁质合成酶基因家族可被分为3大类,8个小类,FGSG06550属于第2大类,第8小类,因此将其命名为FgCHS8;结构域预测同时发现其氨基酸序列含有特定的催化结构域C2(Chitinsynth2,Pfam03142)和细胞色素b5结构域(cytochrome b5-like domain,Pfam00173)。2、构建FgCHS8基因的敲除突变体(△FgCHS8)和回复突变体(C-FgCHS8),发现野生型(WT)、△FgCHS8和C-FgCHS8分生孢子的长、宽和隔膜数差异不显著。检测WT、△FgCHS8和C-FgCHS8在酸、盐、氧化剂和SA胁迫条件下的生长状况,发现△FgCHS8突变体对胁迫的敏感性增加。3、构建FgCHS8与GFP的融合蛋白,在荧光显微镜下观察,发现FgCHS8蛋白位于隔膜和成熟菌丝的细胞膜,说明FgCHS8蛋白主要在禾谷镰刀菌的隔膜和细胞膜发挥作用。4、对接种于1 mM刚果红的WT、△FgCHS8和C-FgCHS8突变体菌丝培养基剖面进行观察时,发现相比于WT和C-FgCHS8突变体,△FgCHS8刚果红颜色明显变浅。测定几丁质和几丁质合成酶含量发现,△FgCHS8几丁质合成酶和几丁质含量比WT和C-FgCHS8突变体均显著减少,这说明FgCHS8编码几丁质合成酶,参与几丁质代谢。5、接种小麦,测定单端孢霉烯(Deoxynivalenol;DON)含量发现,相比WT和C-FgCHS8,△FgCHS8接种麦穗发病面积、扩散速率和DON积累明显受抑制,证明FgCHS8基因对禾谷镰刀菌致病力和DON的合成具有重要影响。
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