禾谷镰刀菌小RNA通路相关基因的功能研究

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小麦赤霉病是世界范围内的一种真菌性病害,禾谷镰刀菌是我国麦类赤霉病的主要致病种。小麦赤霉病的发生,不仅严重影响了小麦的产量和质量,同时侵染的病粒会产生毒素对人畜健康造成巨大威胁。目前小RNA被证实在多种生物学过程中起到调控作用,其中多个关键基因在小RNA的加工和行使功能中发挥重要作用。如Dicer切割dsRNA或者茎环结构的RNA前体成为小RNAs分子,Argonaute蛋白是RNA诱导的沉默复合体(RISC)的核心元件。目前有关这些基因在动植物以及部分真菌中的功能研究也有报道,但在禾谷镰刀菌中这些基因的功能均不明确。RT-PCR结果表明禾谷镰刀菌PH-1在产孢前后FGDCL2和FGAGL2两个基因都有表达,我们构建了FGDCL2和FGAGL2的同源重组敲除载体,通过分割标记法用PEG介导的原生质体转化禾谷镰刀菌,经PCR验证分别得到了2个DCL2基因敲除转化子和2个AGO2基因的敲除转化子。我们对FGDCL2和FGAGL2的敲除转化子KOD21和KOA21进行了一系列生物学形状的研究,发现敲除转化子的菌落形态、菌丝形态、生长速度、分生孢子产量和形态,产子囊壳的能力、子囊孢子的形态及在小麦胚芽鞘上的致病能力与原始菌株PH-1相比均没有显著差异。但KOD21在孢子萌发率、萌发后芽管的长度及毒素相关基因的表达量与原始菌株差异显著,KOA21在孢子萌发过程中菌丝的延长与原始菌株均有显著性差异。上述研究结果初步表明FGDCL2和FGAGL2基因对禾谷镰刀菌的孢子萌发和产毒素方面有一定的影响。有关这些基因禾谷镰刀菌中的详细功能,如在调控禾谷镰刀菌的小RNA加工及行使功能等方面的作用有待于进一步研究。同时明确它们和生长及致病的关系,将有助于我们从另一角度阐明禾谷镰刀菌的致病机理。
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