【摘 要】
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目的:探究KLF4对骨肉瘤生物学功能及肺转移的影响及其可能机制。方法:（1）人种属骨肉瘤细胞系（Saos-2、U2OS）和成骨细胞系（hFOB）中KLF4的表达量分别被Western-Blot、qRT-PCR检测。本院骨肉瘤临床病理切片及正常骨组织的KLF4表达差异通过IHC验证。（2）慢病毒转染人骨肉瘤Saos-2细胞,构建KLF4低表达细胞系KLF4-DOWN,作为实验组;不携带目的基因的阴性
【基金项目】
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the National Natural Science Foundation of China "The role and mechanism of BMI1 and KLF4 dual signaling pathway blockade in the self-renewal and lung metastasis of osteosarcoma stem cells （No.817728
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目的:探究KLF4对骨肉瘤生物学功能及肺转移的影响及其可能机制。方法:（1）人种属骨肉瘤细胞系（Saos-2、U2OS）和成骨细胞系（hFOB）中KLF4的表达量分别被Western-Blot、qRT-PCR检测。本院骨肉瘤临床病理切片及正常骨组织的KLF4表达差异通过IHC验证。（2）慢病毒转染人骨肉瘤Saos-2细胞,构建KLF4低表达细胞系KLF4-DOWN,作为实验组;不携带目的基因的阴性对照病毒转染Saos-2细胞,作为Control组,用qRT-PCR、Western-Blot检测转染效率。RTCA增殖实验检测KLF4对骨肉瘤细胞增殖能力的影响;流式细胞分析技术检测KLF4对骨肉瘤细胞凋亡的影响;骨肉瘤细胞的侵袭和迁移能力分别使用transwell实验和瘢痕愈合实验来验证。qRT-PCR、Western-Blot分析KLF4对肺转移相关指标CXCR4、MMP1、MMP2表达的影响。（3）分别利用KLF4-DOWN和control组细胞构建裸鼠肿瘤模型,根据瘤体大小随时间变化关系,探究KLF4对体内骨肉瘤生长的影响;肺组织进行HE染色,观察KLF4在异体移植瘤模型中对肺转移的影响;通过IHC检测异体移植瘤KLF4的表达情况;通过Western-Blot凝胶电泳检测KLF4对异体移植瘤中的肺转移相关指标CXCR4、MMP1、MMP2表达的影响。结果:（1）在骨肉瘤细胞中KLF4比在成骨细胞中表达高。骨肉瘤组织中KLF4表达量比正常骨组织高。（2）使用慢病毒在Saos-2细胞中敲低KLF4表达,荧光下观察转染效率超90%。经qRT-PCR、Western-Blot验证,KLF4-DOWN组的KLF4表达量显著低于Control组,且实验组肺转移相关指标CXCR4、MMP1、MMP2表达量降低。RTCA结果示,KLF4-DOWN组较Control组细胞增殖能力减弱。流式细胞仪凋亡分析结果示,KLF4-DOWN组较Control组细胞凋亡率增加。瘢痕愈合实验结果示KLF4-DOWN组迁移能力变弱。Transwell结果示KLF4-DOWN组细胞侵袭能力被削弱。（3）体内实验结果显示,KLF4-DOWN组较Control组裸鼠瘤体生长受抑制。HE染色结果显示KLF4-DOWN组较Control组裸鼠肺转移灶减少。FMT结果显示KLF4-DOWN组裸鼠体内MMPs表达量降低。Western-Blot结果显示KLF4-DOWN组裸鼠瘤体内肺转移相关指标CXCR4、MMP1、MMP2表达量下降。结论:（1）骨肉瘤细胞和病理标本中的KLF4高表达（2）敲低KLF4可以在体外负向调节Saos-2细胞的增殖能力,抑制其迁移和侵袭,增加凋亡比例;并降低肺转移相关指标CXCR4、MMP1、MMP2的表达量（3）敲低KLF4在体内可以抑制裸鼠异体移植瘤模型的肿瘤生长和肺转移,并降低CXCR4、MMP1、MMP2的表达量,提示KLF4可能靶向作用于CXCR4、MMP1、MMP2影响骨肉瘤的肺转移。
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