RCN1在骨肉瘤中作用及机制研究

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[背景及目的]骨肉瘤是最常见的骨骼系统恶性肿瘤,约占骨骼所有恶性肿瘤30%。未发生转移的病人的五年生存率为75-77%。骨肉瘤往往在早期便发生远处转移,其中,肺是骨肉瘤转移最常见的靶器官。而当其发生转移后,其五年生存率仅为20%。而且,近几十年来骨肉瘤的治疗方法没有很大进展。我们通过对骨肉瘤病人数据库进行分析发现,其中RCN1高表达者整体生存率明显低于低表达者。本实验的目的在于探究RCN1在骨肉瘤发生发展中的作用机制,探寻骨肉瘤新的治疗方法。[方法]我们通过对网上骨肉瘤病人的数据库进行整合及分析,发现在骨肉瘤病人中RCN1高表达者的整体生存率要明显低于低表达者。为了进一步研究RCN1在骨肉瘤中的作用,我们通过体外培养骨肉瘤细胞系(MG63、HOS、U2OS及143B均来自于ATCC),对其进行慢病毒转染,构建RCN1表达降低骨肉瘤细胞系。利用克隆形成实验去测定RCN1对肿瘤细胞体外增殖的影响;利用Transwell肿瘤侵袭及转移实验测定RCN1对肿瘤细胞体外的迁移和侵袭能力的影响;利用WB实验方法测定RCN1对EMT通路中SNAIL、ZEB1、N-cad及细胞干性基因SOX2、OCT4、NANOG等基因在骨肉瘤细胞中表达的影响;利用Annexin V/PI标记以及流式细胞计数法观察骨肉瘤细胞在不同处理下的凋亡情况并计算凋亡率;通过小鼠皮下瘤种植、小鼠肿瘤细胞尾静脉注射研究RCN1在体内对肿瘤细胞的增殖及侵袭转移的影响。[结果]克隆形成实验发现RCN1可以促进骨肉瘤细胞的体外增殖能力;transwell体外侵袭及转移实验发现RCN1可以提高骨肉瘤细胞的体外侵袭转移能力;通过q-PCR及WB实验发现RCN1促进骨肉瘤细胞EMT通路、细胞干性相关基因及LATS/YAP通路的表达;细胞凋亡实验证明RCN1会促进骨肉瘤细胞对顺铂的耐药;动物实验证实RCN1可以促进骨肉瘤在小鼠体内的增殖。[结论]骨肉瘤病人数据库显示RCN1的表达情况与病人的预后负相关。我们通过体内外实验发现RCN1可以促进骨肉瘤细胞的增殖及侵袭迁移能力。同时,RCN1的高表达可能还与晚期的肿瘤病人对于顺铂的耐药有关,耐药的机制也是我们下一步研究的主要方向。
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