Ala-Gln对断奶仔猪体液免疫及肠黏膜细胞免疫的调控作用

来源 :江西农业大学 | 被引量 : 14次 | 上传用户:sincerity01
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本研究以21日龄早期断奶仔猪为试验对象,研究了Ala-Gln对仔猪体液免疫及肠黏膜细胞免疫的调节作用,并以仔猪小肠上皮细胞(IPEC-1)为模型探讨了Ala-Gln对仔猪小肠上皮细胞增殖与凋亡的调控机制。试验一:Ala-Gln对断奶仔猪外周血细胞因子、免疫器官细胞因子及T淋巴细胞亚群的调节作用本试验采用单因子试验设计,选用遗传背景和体重相近(6.7±0.9kg)、21±2日龄断奶的长白×大白去势仔猪100头,按完全随机区组设计分为4处理,每个处理设5个重复,每个重复5头仔猪。各处理仔猪饲粮为在基础饲粮基础上分别添加0%、0.15%、0.30%和0.45%Ala-Gln。试验期为21d。于试验第7、14、21d从每个重复随机选取1头接近平均体重的仔猪进行前腔静脉采血并屠宰。采集外周血液及免疫器官用于测定细胞因子含量和外周T淋巴细胞亚群分布表达以探讨Ala-Gln对断奶仔猪体液免疫的影响。结果显示,(1)饲粮中添加0.15%、0.30%Ala-Gln提高了仔猪断奶后第7d血液中ALB、TP、免疫球蛋白IgA、IgG的含量(P<0.05),降低了COR的含量(P<0.05);0.30%Ala-Gln组仔猪在断奶后第14d TP、IgA、IgG含量也显著高于对照组(P<0.05),COR的含量则低于对照组(P<0.05);(2)饲粮中添加不同水平的Ala-Gln均可显著降低血清中细胞因子IL-6水平(P<0.05);断奶后第7、14d,0.30%Ala-Gln显著提高了仔猪IL-2、TNF-α水平,0.15%Ala-Gln显著降低IL-5的水平(P<0.05);在断奶后第21d,IL-5水平随Ala-Gln添加量呈二次曲线变化规律,0.45%Ala-Gln组IL-5显著高于对照组(P<0.05)。此外,0.30%Ala-Gln使仔猪脾脏、胸腺中IL-10水平大幅提高(P<0.05),而各Ala-Gln添加组脾脏、胸腺中的TNF-α水平显著低于对照组(P<0.05)。(3)Ala-Gln可在一定程度上增加外周血T淋巴细胞亚群CD4+表达并降低CD8+的表达。各试验处理组仔猪在断奶后第7dCD4+/CD8+比值显著高于对照组(P<0.05)。0.45%Ala-Gln在断奶后第14、21天显著提高仔猪CD4+/CD8+比值(P<0.05)。由此可知,Ala-Gln可提高仔猪血液中免疫球蛋白、抗炎因子的水平同时降低炎性因子的水平,增强仔猪的免疫功能,进而缓解早期断奶应激。试验二:Ala-Gln对断奶仔猪小肠黏膜固有层SIgA浆细胞数量、SIgA及黏膜中细胞因子的含量的影响试验设计同试验一。于试验第7、14、21d,从每个重复选取1头接近平均体重的仔猪屠宰。采集小肠肠段、小肠黏膜以分析小肠黏膜固有层SIgA浆细胞表达及SIgA、黏膜中细胞因子的含量。结果显示,(1)饲粮中添加0.15%~0.45%Ala-Gln均显著提高仔猪断奶后第7、14、21d十二指肠以及空肠黏膜固有层SIgA浆细胞数量(P<0.05),尤其是0.30%Ala-Gln组仔猪在断奶第14d空肠SIgA浆细胞数比对照组增加22.6%(P<0.05)。在回肠段,0.30%Ala-Gln显著提高断奶后第7、14d仔猪SIgA细胞数(P<0.05)。(2)断奶仔猪空肠黏膜SIgA含量随着Ala-Gln添加量呈二次曲线增长规律。在断奶后第7天,0.30%Ala-Gln组仔猪SIgA含量与对照组相比极显著提高了70.4%(P<0.01)。在断奶后第14、21天,0.15%Ala-Gln和0.30%Ala-Gln显著提高了SIgA的分泌量(P<0.05)。(3)饲粮中Ala-Gln添加0.15%和0.30%可显著性提高仔猪早期断奶后第7天黏膜细胞因子IL-2、IL-5的水平(P<0.05);随着日粮中Ala-Gln添加量的增加,各组IL-6的含量呈线性增长趋势,且显著高于对照组(P<0.05)。黏膜TNF-α含量在试验第7、21d随Ala-Gln添加呈线性降低变化,以0.30%和0.45%添加组最低(P<0.05)。由此说明,饲粮中添加适量Ala-Gln可提高肠黏膜固有层SIgA浆细胞数量,黏膜SIgA分泌量及IL-2、IL-6含量,降低TNF-α水平,增强黏膜免疫应答,提高断奶仔猪肠道黏膜细胞免疫。试验三:Ala-Gln对仔猪小肠上皮细胞凋亡的影响本试验以仔猪小肠上皮细胞(IPEC-1)为体外细胞模型,在营养性缺乏Gln条件下体外培养IPEC-1细胞以模拟断奶应激。经含0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0mMAla-Gln的培养基处理IPEC-1后,用流式细胞仪分析测定IPEC-1的凋亡率,采用Western Blot方法检测Caspase-3激活产物和抑制凋亡蛋白Bcl-2的表达量,以探讨Ala-Gln对仔猪小肠上皮细胞凋亡的影响及其作用机理。结果显示,(1)各Ala-Gln处理组中IPEC-1细胞凋亡率均显著低于对照组(P<0.05)。随着Ala-Gln添加量的增加,IPEC-1细胞凋亡率表现为先降低后增加的规律,当Ala-Gln的浓度为1.0mM和2.0mM时,IPEC-1细胞凋亡率最低,显著低于对照组(P<0.05),但两处理组之间差异不显著(P>0.05)。(2)经Western Blot未检测到Caspase-3激活产物和Bcl-2的表达。
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