【摘 要】
：
犏牛（Yattle）是牦牛（Yak）和普通牛（Cattle）杂交产生的杂种后代,具有适应性强、肉质好、生长速度快等杂种优势,但犏牛雄性不育阻碍了杂种优势的再利用和牦牛新品种的杂交培育,解决这一难题是动物遗传学科和种间杂交育种研究的共同期许。6-甲基腺嘌呤修饰（N6-methyladenosine,m6A）是最常见的RNA修饰之一。已有研究发现m6A甲基化相关酶可以影响m6A甲基化水平进而影响生精相
【基金项目】
：
国家自然科学基金项目（项目编号:31802046）； 重庆市自然科学基金（项目编号:cstc2018jcyjA1125）；
论文部分内容阅读
犏牛（Yattle）是牦牛（Yak）和普通牛（Cattle）杂交产生的杂种后代,具有适应性强、肉质好、生长速度快等杂种优势,但犏牛雄性不育阻碍了杂种优势的再利用和牦牛新品种的杂交培育,解决这一难题是动物遗传学科和种间杂交育种研究的共同期许。6-甲基腺嘌呤修饰（N6-methyladenosine,m6A）是最常见的RNA修饰之一。已有研究发现m6A甲基化相关酶可以影响m6A甲基化水平进而影响生精相关基因表达,参与哺乳动物精子发生的过程。本试验选取成年雄性普通牛（n=8）、牦牛（n=8）和犏牛（n=8）的睾丸等组织,通过探讨m6A相关基因的表达模式、m6A甲基化水平及其调控基因的表达差异、对ALKBH5的蛋白定量、细胞定位、SNP位点和micro RNA的靶向调控作用进行分析。获得如下结果:（1）通过对三种牛睾丸组织、肝脏组织、肌肉组织常规PCR和RT-qPCR,常规PCR结果显示:ALKBH5、FTO、METTL3、METTL14、METTL16、WTAP、ZC3H13、YTHDC1、YTHDC2、YTHDF1、YTHDF2、YTHDF3这12种m6A甲基化相关基因在组织中广泛表达。RT-qPCR结果显示:在犏牛睾丸组织中ALKBH5、FTO、METTL14、WTAP、ZC3H13、YTHDC2、YTHDF1、YTHDF2的表达量与普通牛相比极显著降低（P<0.01）;犏牛睾丸组织中METTL3、METTL16、YTHDF3的表达量与普通牛相比显著降低（P<0.05）;在肝脏和肌肉组织中m6A相关基因相比睾丸组织,表达差异性变化较少。结果表明m6A相关基因在犏牛睾丸组织中特异性表达紊乱。（2）采用三种牛睾丸的RNA进行Epi Quik M6A RNA Methylation Quantification Kit（比色法）试剂盒测定普通牛、牦牛和犏牛睾丸组织中m6A甲基化的整体水平。结果显示:犏牛睾丸组织的m6A甲基化水平极显著低于普通牛（P<0.01）,犏牛睾丸组织的m6A甲基化水平略低于牦牛,无显著差异。结果表明在犏牛睾丸组织中m6A相关基因均显著性表达下调的情况下,m6A甲基化整体水平也有所下降。（3）根据文献查阅,选取了15个受m6A调控的生精相关基因进行RT-qPCR,结果显示:参与精原干细胞维持、精原细胞增殖与更新的BCL6B、UHRF1、DNMT3B、GFRA1、SOHLH2在犏牛睾丸中显著下调（P<0.05）,参与抑制凋亡的EIF4G1显著下调（P<0.05）,维持SSC稳态和参与精子发生启动的FOXO1显著上调（P<0.05）,结果表明m6A修饰的生精基因表达紊乱。（4）利用Western Bolt和免疫荧光对三种牛睾丸等组织中的ALKBH5蛋白进行分析发现,与普通牛相比ALKBH5蛋白在犏牛睾丸组织中特异性的表达上调（P<0.05）;ALKBH5蛋白信号在普通牛和牦牛的精原细胞、精母细胞和圆形精子中富集,在犏牛的精原细胞和精母细胞时期中ALKBH5蛋白信号明显少于普通牛和牦牛。（5）对三种牛睾丸组织中的bta-miR-200a进行RT-qPCR,结果显示犏牛中的bta-miR-200a的表达量显著低于普通牛和牦牛,结果说明bta-miR-200a可能是ALKBH5蛋白表达水平升高的潜在因素。为了进一步验证,构建了野生型pmirGLO-ALKBH5-WT和突变型pmirGLO-ALKBH5-MUT进行双荧光素酶报告试验,结果表明bta-miRNA-200a的miRNA mimics可以结合ALKBH5序列并抑制其的表达。（6）根据转录组测序结果选取了ALKBH5的SNP位点:1746T>C、1768A>C、1898A>G和2318ins CTCT,根据这些位点进行设计引物和Sanger测序分析,结果表明:转录组结果与测序结果一致,并发现一个转录组测序中没有的1953C>T突变位点。但这些变异位点主要位于非编码区。表明ALKBH5编码区序列在三种牛中是保守的。总之,本研究结果表明:犏牛睾丸组织中,m6A去甲基化酶ALKBH5和FTO的mRNA表达水平显著高于普通牛和牦牛,但这两基因在三种牛间的肝脏和肌肉组织中无显著性差异,表明m6A修饰相关酶在犏牛睾丸中特异性表达紊乱;ALKBH5蛋白信号定位于精原细胞、精母细胞和圆形精子,在犏牛的精原细胞和精母细胞时期中ALKBH5蛋白信号明显减少。犏牛睾丸组织中m6A甲基化总体水平显著低于普通牛;受m6A调控的参与生精过程基因在犏牛中显著下调。犏牛睾丸组织中的bta-miRNA-200a显著性下调可能影响了靶基因ALKBH5蛋白的表达。本研究结果阐述了bta-miR-200a通过抑制ALKBH5表达调控普通牛、牦牛和犏牛睾丸组织中m6A甲基化水平,影响m6A靶基因的表达与功能,丰富了犏牛雄性不育表观遗传的研究数据,为解决犏牛不育提供新思路。
其他文献
花青素作为天然的多酚化合物,是紫薯中的重要功能活性成分,具有抗炎,抗癌,抗氧化和抗衰老等作用。随着人们对健康食品需求的日益增加,开发富含花青素的发酵制品和将其作为色素添加到发酵产品成为日后新趋势。目前,菌株对紫薯花青素影响的研究较少,本实验以紫薯花青素为研究对象,对菌株发酵前后紫薯花青素的含量、组成成分、抗氧化活性、稳定性、进行了分析,此外,利用秀丽隐杆线虫作为动物模型,研究了发酵前后紫薯花青素的
乳腺炎是奶牛最为常见的疾病之一,给畜牧业造成了严重的经济损失。大肠杆菌是引起临床型乳腺炎的主要病原微生物。在经典的炎性通路中,TLR4（Toll-like receptor 4）识别大肠杆菌毒性因子LPS（lipopolysaccharide）,通过髓样分化因子88（My D88）激活MAPK（mitogen-activated protein kinase）和NF-κB（nuclear fact
绿肥覆盖在水土保育、养分蓄持、土壤改良培肥中的作用已得到国内外专家认可。紫色土具有粗骨性强、保水保肥能力弱等特征,主要分布于四川盆地的丘陵山地。关于绿肥覆盖对紫色土水土肥流失的研究较少,尤其对壤中流较强的紫色土坡耕地果园鲜见报道。对此,本文首先通过收集Web of Science和中国知网（CNKI）数据库中的85篇相关文献数据进行了meta分析,定量研究了坡耕地果园生草覆盖管理在减少径流、土壤和
2011年颁布的《义务教育数学课程标准》（以下简称《课程标准》）对学生问题解决能力的培养作出了明确的要求,小学数学问题解决方面的文献集中在较浅的简单数学问题解决的研究,缺乏对较为复杂问题、较高年级学生的高层次数学思维过程的研究,对于当前培养小学生复杂问题解决能力的目标达成度还不够。小学数学复杂问题具有问题情境贴近生活实际、已有数学信息需要深入挖掘、解题步骤较多、蕴含的数学思想明显、需要学生具有较高
东方百合‘索邦’（Lilium spp.Sorbonne）是多年生草本球根植物,为鲜花切花产业的重要经济作物,但是病害造成损失严重。病程相关蛋白（Pathogenesis-related Proteins,PR）是植物受到生物胁迫时所积累的一类蛋白的总称,广泛参与植物对生物和非生物胁迫的应答,是植物抗病性的重要组成部分。对百合LhSorPR4b、LhSorPR10a和LhSorPR10b基因的克隆
抗体是机体分泌的可与相应抗原特异性结合的免疫球蛋白,主要存在于机体的内环境中,具有保护机体健康的功能。在哺乳动物中,母源抗体通过母乳进入幼子肠道内,能够给予肠道被动免疫,使其免受病原微生物的感染。近些年来,越来越多的研究发现,在幼龄动物饲料中添加抗体可有效预防动物肠道疾病。因此,研制动物用口服抗体对保障动物健康具有重要意义。本研究构建了四种猪用口服抗体,选用毕赤酵母表达系统进行重组表达,探究重组抗
干旱在科技发达的今天依然是人类面临的主要自然灾难之一,它的发生频率高、持续时间长、影响范围广,严重影响植物的生长、发育和繁殖。近年来果树业发展迅速,水分是影响果树质量和产量的重要因子之一。梨树是我国南北方最重要的经济种植果树之一,目前我国很多梨产区的自然降水量以及人工灌溉量远远不能满足梨树生长所需,另一方面很多梨产区的土壤养分匮乏、有机质含量低、土层浅薄,保水力差等问题都阻碍了梨产业的长远发展。丛
本论文主要基于Lyapunov稳定性定理以及凸集的有关理论，运用LMI方法针对目前控制理论及应用中的若干问题进行了研究，主要内容包括以下三个部分．第一部分首先简要介绍了控制理论，并把其发展分为三个阶段，而后就LMI方法及其在控制理论中的应用进行了讨论，最后给出了论文的主要研究工作及意义．第二部分研究利用LMI求解一类时滞不确定系统的H∞性能问题，首先讨论了系统的稳定性，然后又构造了无记忆状态反馈控
肿瘤细胞线粒体功能障碍与肿瘤细胞存活、增殖与转移紧密相关,在维持肿瘤细胞正常生命状态中扮演着重要角色。肝癌细胞线粒体DNA在细胞色素c氧化酶与NADH脱氢酶等保守位点的突变,可能会抑制肝癌细胞的氧化磷酸化,促进肝癌的发生与发展。现有研究表明,外源线粒体移植能够抑制肿瘤细胞的增殖并改变其呼吸状态,但其作用机制并不明确。另有研究报道,雄性小鼠来源线粒体（Mitochondria from male m
李（Prunus salicina）由于其较高的营养与经济价值,近些年来发展迅速,逐渐成为重要的经济作物之一。李树在整个中国乃至全世界都有广泛种植,我国的南方地区是公认的李子优产区,但是南方的大部分地区是季节性干旱的高发地带,不仅强度大而且持续时间长。因为高温天气时水气的蒸发散失量大,所以炎热和干旱往往在同一时间发生。李树大多栽培于丘陵山地之中,土壤贫瘠且不易储存水分,更易受到干旱胁迫的侵袭,这些