背景肠道病毒（enterovirus,EV）感染除发热出疹外,可见呼吸道感染、心肌损伤、脑炎等,部分可发展成系统性疾病。不同地区在不同时间流行的EV血清型有所不同,一些地区可出现特定血清型EV的局部流行。血清型鉴定目前主要用于流行病学监测,临床实验室较少开展。EV基因组为单股正链RNA,其中5’-UTR序列高度保守,是检测通用靶标,适于初筛。衣壳蛋白VP1区是最准确的分型靶标,但该靶标检测敏感度低,操作繁琐。5’-UTR非分型首选,有学者认为其对血清型区分有价值,检测敏感度高。对于国内近几年流行主要血清型,5’-UTR分型是否适用,性能如何,目前缺乏系统评价。除手足口病为法定传染病外,EV感染引起的呼吸道感染、病毒性脑炎等疾病的准确流行病学信息明显不足。EV流行的血清型因时间、地域而变化,与呼吸道感染的相关性等缺乏系统报告,对各血清型引起的呼吸道感染的临床特征的比较研究报道不多。在欧美引起严重呼吸和神经系统疾病的EVD68型,在亚洲多个地区也有报道,但目前EVD68的真实发病率尚不清楚。由于临床实验室没有普及EV血清型鉴定和针对EVD68的分子检测方法,目前监测资料受时间和地域的较大局限,国内报道不多。首先,我们对直接从临床标本中进行血清型检测的基于5’-UTR区扩增联合测序的方法进行了性能评估;其次,在确定该法可用于呼吸道标本EV血清型检测后,我们对2014-2018年本院的呼吸道感染患儿EV血清型进行调查,比较不同EV血清型感染患儿的人口学和临床特征。同时对患儿肠道EV血清型及无呼吸道症状儿童的EV携带情况进行了调查。最后,对儿童呼吸道感染最重要的EV血清型—EVD68型相关病例进行了临床特征及病毒系统发育分析。方法1.以我院就诊的疑有呼吸道或肠道EV感染患儿为研究对象,收集经EV通用型实时荧光PCR法检测为阳性的肛拭518例、鼻拭148例。直接从标本中提取核酸,进行5’-UTR区RT-PCR、测序并比对分型,与VP1区简并引物扩增测序分型结果比较,不一致的标本经血清型特异性RT-PCR验证。以VP1区分型结合型特异性逆转录PCR的结果为参考,评价5’-UTR测序分型的方法在EV血清型鉴定中的应用价值。2.以有发热、呼吸道症状（咳嗽、流涕、呼吸困难等）等特征的,即疑有呼吸道EV感染的住院患儿为研究对象。EV阳性者同时用5’-UTR与VP1法进行分型,分型以VP1法为准,以5’-UTR法结果为补充;未成功分型者不纳入后续研究。统计描述呼吸道EV血清型构成;对呼吸道中各血清型感染儿童的人口学和临床特征进行分析比较。3.5’-UTR法初筛为EVD68阳性的标本,由特异性VP1区部分序列巢式PCR确认。对确认EVD68感染儿童进行临床特征分析。获确认的标本扩增并克隆VP1区927bp完整序列,同时从NCBI下载各地EVD68的VP1区完整序列,基于该序列建系统发育树,比较广东与国内外各地区EVD68的进化差异。结果1.5’-UTR法对EV的分型率高于VP1法。以VP1法为参考,对肛拭主要检出的血清型,5’-UTR法敏感度（57.1%～100%）、特异度（67.4%～98.1%）和方法一致性（kappa值0.188～0.847）因血清型而异;对鼻拭主要检出的血清型EVD68,敏感度100%,特异度91.1%,一致性差（kappa值0.217）。分型不一致标本,大部分可经型特异性RT-PCR确认。以VP1法联合型特异性RT-PCR为参考,5’-UTR法的敏感度、特异性以及与参考方法的一致性均提高。2.近年广东呼吸道EV于4到8月高发,感染儿童较低龄,多见男性。呼吸道和肠道感染血清型差异大,呼吸道常见鼻病毒C/A/B、EVD68及柯萨奇病毒A/B组的部分型。呼吸道感染出疹率低,各种（型）感染儿童人口学和临床特征差异不大。健康儿童可携带EV,以鼻病毒C/A常见。3.2014年欧美爆发流行以来,EVD68在广东有流行,在呼吸道感染儿童中阳性率0.68%。感染以哮喘样呼吸困难为特征表现。本研究检测到的EVD68均为B3亚型,系统发育分析发现与我国绝大多数检出毒株进化关系相近。EVD68进化方向与地理位置有关系。结论5’-UTR法对于近年流行的EV血清型诊断具有较优性能。敏感度高为优势,对不同血清型的特异度有差异,应用需考虑其适应性和局限性。EVD68是除鼻病毒外呼吸道最重要的EV血清型。呼吸道不同种（型）EV感染表现差异不大,RhV在致呼吸道感染的重要性需进一步评估。EVD68在我国流行的毒株以B3亚型为主,可引起呼吸系统、神经系统感染等表现,以哮喘样表现为特征。