第一部分不育患者无精子因子缺失的分子与临床特征　　 目的：近年来，Y染色体长臂无精子因子(AZF)微缺失与男性不育关系的研究已经取得了很大的进展。然而，AZF微缺失的形成机理及各种缺失类型与临床表型之间的关系还不十分确定。本研究的目的是探讨中国不育男性的Y染色体微缺失的发生率、缺失类型以及基因型与表型之间的关系。本研究还对其中1例伴Y染色体长臂AZFb部分缺失和短臂Yp11.2区域重复的严重少弱精子症患者进行了祥细的分子遗传学研究。　　 方法：本研究对2005年至2009年本院男科门诊502例非梗阻性无精子症和306例严重少精子症的不育男性进行Y染色体AZF缺失分析。采用79个序列标签位点(STS)分析和比较基因组杂交(CGH)技术对其中1例Y染色体结构异常患者进行长臂AZFb区域断裂位点定位和短臂Yq11.2区重复的分析。用牙釉蛋白基因(AMEL)和PRK基因拷贝数分析验证Y染色体短臂的重复。　　 结果：AZF总体缺失率为7.80％(631808)，其中无精子症不育男性缺失率为9.16％(461502)，严重少精症患者为5.56％(17/306)。完全的AZFa缺失或AZFb缺失患者的精液中均没有成熟精子，而AZFc缺失的表型是多样化的。1例AZFb部分缺失的少弱精子症患者，经11年随访发现其精子密度呈轻度进行性下降。最常见的缺失类型为AZFc b2/b4亚型，占60.32％(38/63)，其中39.47％(15/38)的患者精液中能发现成熟精子，其中1例为自然遗传的AZFc b2/b4缺失。63例缺失患者中仅1例AZFc b2/b4缺失患者的精子密度超过2×109/L。Y染色体结构异常患者显示正常的46，XY核型，短臂Yp11.2区有约2.4 Mb大小重复，长臂AZFb缺失区域大小为5.25 Mb，缺失区域包括8个蛋白编码基因和4个非编码的转录本基因，缺失未累及RBMY和PRY基因家族。AZFb缺失的远端和近端断裂点均不在回文结构和反向序列之中。　　 结论：AZF微缺失对精子发生障碍具有良好的诊断和评估价值。对Y染色体微缺失的大样本临床研究有利于进一步明确基因型与表型的关系，更好地理解AZF缺失的机制。Y染色体结构异常患者的核型为46，XY，arr cgh YP11.2(AMELY→TTTY11)×2，Yq11.22(XKRY→RPS4Y2)×0。该患者AZFb部分缺失的两端断裂位点均不在回文结构和反向序列之中，其发生机制不是染色体内非等位同源重组(NAHR)。AZFb部分区域XKRY→RPS4Y2的缺失影响精子发生，但不完全阻滞精子发生。自然遗传的Yp11.2(AMELY→TTTY11)区域重复可能与男性不育无关。　　 第二部分泛素特异蛋白酶26(USP26)基因多态性与男性不育关系的研究　　 目的：X染色体连锁的泛素特异蛋白酶26(USP26)基因在人类睾丸中特异表达，其变异与精子发生的关系存在争议。本研究旨在研究中国汉族男性USP26基因的多态性分布及其与男性不育的关系。　　 方法：本研究用基因组DNA测序的方法分析221例不育男性(包括无精子症、弱精子症、少精子症和少弱精子症患者)和101正常生育男性的USP26基因全序列，分析其多态性和基因型在不同类型患者与生育对照之间的差异。　　 结果：本研究共发现6个变异位点：370-371insACA、494T>C、508G>A、576G>A、1044T>A和1423C>T，对应的氨基酸改变分别为T123-124ins、L165S、G170R、E192E、F348L和H475Y。其中576G>A(E192E)为同义突变，其氨基酸序列没有改变。508G>A(G170R)为首次发现，其余5种变异在先前的研究中已有报道。与猕猴基因组比较发现370-371insACA和494T>C为回复突变。576G>A在正常生育组中高达78.2％，明显高于不育男性的49.1％(P<0.01)；其余5个位点在不育和生育人群中没有明显差异(P>0.05)。本研究共发现9种USP26基因型。在不育与生育人群的主要基因型有370insACA+494C+1423T、576A和576G型。576A和576G型在不育与生育人群中的分布存在明显差异(P<0.01)，而370insACA+494C+1423T型没有统计学差异(P>0.05)。576A型在正常精子活力组明显高于低活力组(P<0.05)；576G型在弱精子组明显低于正常生育男性对照(P<0.01)；370insACA+494C+1423T型在不同精子密度和精子活力组间均没有明显差异(P>0.05)。　　 结论：我国汉族人群中USP26基因370insACA+494C+1423T串突变与精子发生没有直接关系。USP26基因576G>A位点的同义单核苷酸多态性(SNP)在不同精子活力组间有显著差异，576A可能有潜在的促进精子活力的作用。