卵巢里蕴含着数量众多的卵细胞,是一个很好的雌性生殖细胞资源库。如果通过玻璃化冷冻的方式保存健康的卵巢组织块,然后在需要的时候快速复苏,再原位移植回盆腔,可望恢复母体的自然生育能力。目前,已有零星的关于人类卵巢冷冻移植并成功产出新生儿的报道,在动物身上也已有不少尝试。但冷冻卵巢原位移植措施对受体及其后代是否会产生一定的不良影响,尚未见很明确的报道。本研究选择2月龄的C57BL/6小鼠为主要实验对象,利用小鼠冷冻卵巢原位移植模型的建立,探索母鼠生殖力恢复能力,并检测其后代在生长发育、繁殖和遗传等方面的安全性。这为探索该技术应用于人类的生殖安全性打下了前期动物模型实验基础。研究过程和结果如下:（1）实验组通过把毛色为黑色的B6小鼠的卵巢原位移植入毛色为灰黑色的杂交群小鼠B6FVBF1的盆腔,再跟雄性B6小鼠交配,产下了纯黑毛色的后代;对照组一用雌性B6FVBF1小鼠跟雄性B6小鼠交配,产下了毛色分离的后代;对照组二用雌性B6小鼠接收同品系B6小鼠卵巢移植,再跟雄性B6配种,结果产下了后代毛色均为黑色的小鼠。实验表明:B6小鼠冷冻卵巢原位移植模型的建立是成功的。（2）把2月龄的B6小鼠分为实验组、手术对照组、空白对照组。手术组先将供体卵巢进行超低温玻璃化冷冻,两月后快速复苏,再进行同种异体原位移植。手术对照组用新鲜卵巢自体原位移植。空白对照组不做实验处理。观测玻璃化冷冻复苏后的卵巢组织结构,从HE染色石蜡组织切片可以观察到,冷冻卵巢外观形态保持完好,皮质部各级卵泡清晰可见,颗粒细胞排列有序。通过透射电镜切片可以观察到,冷冻卵巢细胞胞浆中细胞器形态正常,内质网及线粒体结构完整,基质电子密度均匀。组织学上没有观察到冷冻复苏过程带来的明显损伤。通过阴道脱落细胞涂片对术后母鼠进行动情周期恢复检查,发现实验组母鼠能在手术三周后恢复动情周期。对术后母鼠进行繁育力检测,各组间胎间隔、死产及吃仔率均没有显著差异。对其后代进行生长发育观测,比较各组间每胎产仔数、四个月产仔数、六个月产仔数,发现实验组比手术对照组和空白对照组每胎产仔数有所下降,实验组比空白对照组的四个月产仔数有所下降。实验组和手术对照组比空白对照组六个月产仔数略有下降。而其它指标均无显著性差异。观察卵巢冷冻移植母鼠所产后代,发现其仍具有正常的生育力,母性正常。总体看来,通过玻璃化冷冻卵巢再移植,可以有效地保存小鼠的生育能力,并且其后代能够正常生长、发育、繁殖。（3）用成年冷冻卵巢原位移植子代小鼠跟正常成年B6小鼠对照,做以下六项行为学检测:转棒实验、旷场实验、新物体识别实验、高架十字迷宫实验、社交行为学实验、水迷宫实验。结果表明:实验组与对照组正常B6小鼠比较未见显著差异。说明冷冻卵巢原位移植技术所得后代在心理焦虑水平、学习能力、社交水平、运动技巧、身体耐力、记忆能力等方面无异于正常小鼠,验证了玻璃化冷冻技术在这些方面的生殖安全性。（4）通过皮肤移植实验未发现卵巢移植小鼠后代与B6小鼠间有异体排斥反应,移植皮片生长良好,被受体永久接收。冷冻卵巢后代全基因组重测序跟数据库中标准B6品系小鼠序列比对后发现,其变异水平较低,引起蛋白质功能变化的风险较小。这些结果说明通过冷冻卵巢原位移植所产后代在遗传学上是安全可靠的。（5）把2月龄青年B6小鼠的卵巢玻璃化冷冻复苏后移植进1.5岁的B6老龄小鼠盆腔内,结果能使B6老龄小鼠体内生殖激素水平提高,但配种后未能观测到有后代成功产出,说明青年小鼠的卵巢冷冻复苏后移植进老龄小鼠的体内,仅起到了部分生殖激素水平调节作用,这可能跟老龄小鼠生殖系统大环境的过度衰老有关。以上实验表明,卵巢玻璃化冷冻保存和原位移植技术使切除卵巢的青年小鼠恢复了自然生育能力。尽管在一定程度上使受体母鼠产仔数有所下降,但其后代在生长发育、繁殖、行为学、遗传学等方面未见显著不良影响。尽管该技术在1.5岁老龄鼠身上仅能提高生殖激素分泌水平,未能恢复产仔能力,但其对小鼠的作用总体看来是安全可靠的,不失为一种方便实用的雌性生殖力保持方法。